۱-۲-۶-۱- ریخت شناسی و کشت
سالمونلا از نظر اندازه متغیر است.بیشتر گونه‌ها با بهره گرفتن از تاژکدار اطرافی،‌متحرک هستند.به سهولت در محیط‌ها ی ساده آزمایشگاهی رشد میکنند اما هرگز لاکتوز یا سوکروز را تخمیر نمی‌نمایند.آنها از سوکروز و گلوکز اسید و گاهی گاز تولید می‌کنند.معمولاً سولفید هیدروژن تولید می‌کنند.در شرایط انجماد برای مدت‌ها ی طولانی در آب باقی می‌مانند.تقریبا همواره از طریق غذا و یا نوشیدنی‌های آلوده و به روش خوراکی وارد می‌شوند[۳۲].

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۱-۲-۶-۲- بیماری زایی
سالمونلا تیفی و سالمونلا پارا تیفی به میزان بالایی با انسان‌ها سازگاری یافته اند و در حیوانات ایجاد بیماری نمی‌کنند. از حیوانات ومحصولات حیوانی به انسان انتقال می‌یابد وموجب بیماری‌هایی از قبیل التهاب روده،‌ عفونت سیستمیک وتب روده ای می‌شود[۳۲, ۳۳].
۱-۳- روش‌ها ی بررسی اثرات ضد میکروبی
تعیین وسنجش حساسیت باکتری‌ها نبست به یک عامل ضد میکروبی در in-vitro را آنتی بیوگرام می‌گویند. برای تعیین حساسیت باکتری‌ها به عامل ضد میکروبی به روش‌های زیر می‌توان عمل کرد: روش های رقتی و روش‌ها ی انتشار.
در هر دو روش اثر ضد باکتریایی را با بهره گرفتن از اثرات آن در جلوگیری از رشد باکتری‌ها سنجیده می‌شود[۳۵].
۱-۳-۱- روش های رقتی
در این روش از رقیق کردن عامل ضد میکروبی به نسبت‌ها ی معین استفاده می‌شود و خود به دو روش تقسیم می‌شود:
۱-۳-۱-۱- روش لوله^[۲۵]
که خود دو روش دارد:
۱-Micro dilution Method
۲-Macro dilution Method
این روش بسیار دقیق است ولی وقت زیادی را صرف می‌کند.در این روش رقت‌ها ی مختلف از عامل ضد میکروبی را به همراه محیط کشت مایع و غلظت یکسانی از کشت باکتریایی را در لوله‌ها ی متوالی ریخته و پس از سپری شدن مدت زمان لازم،‌ رشد و یا عدم رشد میکروارگانیسم مورد آزمایش را با توجه به غلظت عامل ضد میکروبی ارزیابی کرده و پایین ترین غلظتی را که توانسته از رشد میکروب‌ها جلوگیری کند به عنوان MIC ^[۲۶]
عامل ضد میکروب در نظر می‌گیرند[۳۵]
۱-۳-۱-۲- روش پلیت^[۲۷]
در روش رقیق کردن در آگار به جای محیط مایع از محیط جامد استفاده می‌شود.
۱-۳-۲- روش‌ها ی انتشار
اصول: در این روش‌ها ماده مورد آزمایش را روی محیط جامد قرار داده تا به داخل آگار منتشر شود.اگر ماده از عوامل باکتریواستاتیک یا باکتریوسید باشد، نتیجه به صورت‌ها له عدم رشد مشاهده می‌شود.
اندازه‌ها له‌ها،‌ نمادی از غلظت و یا مقدار ماده مورد اندازه گیری می‌باشد.ارتباط خطی بین اندازه‌ها له ولگاریتم غلظت ماده مورد آزمایش وجود دارد.با اندازه گیری قطری که ماده مورد آزمایش انتشار پیدا کرده با توجه به رشد یا عدم رشد باکتری مورد آزمایش و مقایسه آن با استاندارد مشخص،‌ قدرت ماده مورد آزمایش محاسبه می‌شود[۳۵].
انتشار در محیط جامد به ۲ روش صورت می‌گیرد:عمودی یا خطی^[۲۸] و افقی^[۲۹]
۱-۳-۲-۱- انتشار عمودی
در این روش حجمی ‌از محلول مورد اندازه گیری در بالای ستونی از محیط کشت جامد حاوی میکروارگانیسم قرار می‌گیرد و اجازه داده می‌شود تا به طرف پایین انتشار یابد.طول ستونی از محیط کشت که در آن رشد یا عدم رشد دیده می‌شود اندازه گیری و غلظت ماده مورد آزمایش مربوط به طول ستون خوانده می‌شود.با مقایسه با منحنی‌های استاندارد مقدار آن مشخص می‌شود.منحنی استاندارد همچنین با تهیه ستون‌ها یی و با رقت‌ها ی معین از استاندارد جسم مورد آزمایش تهیه می‌گردد.این روش به دلیل اشکالات زیر به ندرت مورد استفاده قرار می‌گیرد.
حتما بایستی میکروارگانیسم از نوع بی هوازی اختیاری انتخاب شود.
محلول مورد اندازه گیری باید استریل باشد.
در تشخیص منطقه خاتمه عمل اشکال وجود دارد.
روشی پر زحمت بوده و برای شستشو وآماده سازی وسایل احتیاج به دقت زیاد دارد.
تنها مزیت این روش آن است که میزان انتشار در آگار را از نظر جبری بهتر می‌توان معین کرد[۳۵].
۱-۳-۲-۲- انتشار افقی
پنج روش انتشار افقی وجود دارد که در تمام آنها ماده مورد آزمایش از قسمت مرکزی به اطراف انتشار یافته و ایجاد ‌هاله‌های رشد یا عدم رشد می‌کند که قطر‌ها له‌ها مربوط به غلظت ماده مورد آزمایش است.
این روش‌ها عبارتند از:
روش سیلندر پلیت^[۳۰]
روش چاهک پلیت^[۳۱]
روش قطره پلیت^[۳۲]
روش دیسک کاغذی^[۳۳]
روش دیسک براث که متداول ترین روش برای آزمایش آنتی بیوگرام است که در آن محیط کشت به جای جامد مایع است.
۱-۳-۲-۳- فاکتور‌ها ی موثر در ا ندازه گیری به روش انتشار
در انجام این روش باید به فاکتور‌ها ی زیر توجه کرد تا روی نتایج اثر نگذارد۰
۱-۳-۲-۳-۱- آگار
عمق آگار: آگار را ممکن است در پلیت‌ها ی خیلی نازک تقسیم نمایند.لایه‌ها ی نازک ایجاد‌ها له بزرگ تر می‌کنند.اکثر محققین لایه‌ها ی بین ۳-۵ میلی متر را مناسب می‌دانند.به طور کلی مشخص نمودن بهترین ضخامت از آگار در پلیت‌ها و به کار بردن آن در تعیین مقدارچندان مهم نیست بلکه باید توجه داشت که در یکسری آزمایش تمام پلیت‌ها به یک ضخامت پر شده باشند.بدین منظور باید پلیت‌هایی یک اندازه با کف مسطح انتخاب کرده ویک حجم معین از آگار را در هر یک از آنها ریخت.
خشکی آگار: اگر ژل آگار به حد کافی خشک نباشد باعث ایجاد‌ها له‌ها یی با کناره‌ها ی نا مشخص می‌شود.برخی از محققین عقیده دارندکه خشک کردن از کارهای اساسی است.در صورتیکه برخی دیگر از خشک کردن خودداری و صرف نظر می‌کنند.نتیجه این دو بررسی نشان داده است که اگر آگار کمی‌ خشک باشد‌ها له‌ها بهتر ظاهر خواهند شد.در موقع خشک کردن باید توجه داشت که از ورود آلودگی هوا جلوگیری شود و با برگرداندن پلیت‌ها روی در آنهامی‌توان این مشکل را حل نمود.خشک کردن را می‌توان در حرارت محیط یا با قرار دادن در گرمخانهای که حرارت آن را زیادتر کرده باشندانجام داد. مدت زمان لازم جهت خشک کردن بستگی به رطوبت آگار دارد.
مقدار آگار: عده ای معتقدند حساسیت روش انتشار با کم کردن مقدار آگاردر محیط کشت زیادتر می‌شود.در هر صورت مقدار آگار به کار رفته در اندازه گیری موثر است.
pH آگار: منظور اصلی این است که در حدودی مناسب،‌ بهترین pH اپتیمم برای رشد میکروارگانیسم‌ها انتخاب شود. زیرا قطر‌ها له‌ها با تغییر pH آگار تغییر می‌یابد.
۱-۳-۲-۳-۲- شرایط کشت در گرمخانه
این شرایط شامل زمان و حرارت مناسب جهت انکوباسیون است که بسته به میکروب و موارد مورد سنجش متفاوت است.میزان انتشار مواد بوسیله‌ها له‌ها ی ایجاد شده مشخص می‌شود که این خود بستگی به میزان رشد میکروب آزمایشی دارد و فعالیت ماده فقط بوسیله میزان انتشار مواد قبل از شروع تکثیر میکروارگانیسم اندازه گیری می‌شود.
۱-۳-۲-۳-۳- طرز قرار گرفتن ارگانیسم روی آگار
۱-۳-۲-۳-۴- مواد مورد آزمایش(ماده آنتی باکتریال)
خصوصیات ماده ای که برای تعیین مقدار آزمایش می‌شود بایستی به شرح زیر باشد: دارای اثر محرکه یا جلوگیری کننده نسبت به میکروارگانیسم باشد.در حلالی قابل انحلال باشدکه در غلظت مصرف شده با اندازه‌گیری تداخل نداشته باشد.
انتخاب مقدار لازم از ماده اندازه گیری شونده بستگی به فعالیت آن ماده نسبت به میکروارگانیسم مورد نظر دارد[۳۵].
۱-۴- عوامل موثر بر کشت میکروارگانیسم‌ها
همانطور که قبلا توضیح داده شد در اینجا ما بر روی میکروب‌ها ی اشیریشیاکلی،‌سالمونلا تیفی، هلیکوباکتر پیلوری،‌ ویبریو کلرا، لیستریا مونوسیتوجنزو شیگلاسونئی بررسی میکرو بیولوژیکی انجام می‌دهیم.در بررسی میکروارگانیسم‌ها باید عوامل زیر را در نظر بگیریم:
۱-۴-۱- سن وشرایط کشت
کشت را باید در شرایطی نگهداری نمود که در تمام مواردی که آن را برای سنجش به کار می‌برندنتیجه یکسان حاصل شود.در مورد اندازه گیری‌ها یی که کشت را به مدت یک شب در گرمخانه قرار می‌دهندسن ارگانیسم‌ها ممکن است بین ۱۸-۲۴ ساعت بوده،‌ بنابراین در این مورد مرحله وقفه کمتر اهمیت دارد.کشت‌ها ی کهنه به دلایل زیر برای آزمایش مناسب نمی‌باشند:
۱- فزونی میکروب‌ها ی مرده باعث رشد نا کافی خواهد شد.
۲- تغییر در فاکتور‌ها ی لازم برای رشدو تغییر در حساسیت نسبت به مواد ضد میکروبی.
۳- استاندارد نبودن مقدار میکروب به علت تغییراتی در تعداد سلول‌ها ی زنده.
۴- امکان اتولیز و آزاد شدن موادی که ممکن است با اندازه گیری تداخل داشته باشند.