۵-۲-شروع شبیه سازی:
از آنجا که بررسی برهمکنش گرافن و پروتئین یکبار در محیط آبی و بار دوم بدون حضور آب انجام گرفته است. پس در هر قسمت از این فصل علاوه بر توضیح نتایج به دست آمده به بررسی برهمکنش در محیط آبی و بدون آب خواهیم پرداخت. یادآوری می کنیم که راه اندازی شبیه سازی برای هر دو مورد یکسان بوده و تمام مراحل شبیه سازی با نرم افزار متن باز لمپس انجام گرفته است.

سیستم شبیه سازی ما یک جعبه به ابعاد x=74cm y=74cm z=40cm انتخاب شده است. یک گرافن به ابعاد cm50در cm 50در وسط جعبه قرار می دهیم( شکل۵-۱):
(شکل ۵-۱):سیستم شامل:آب،پروتئین و گرافن
پروتئین را در ابتدا در فاصله z=10از گرافن و در بالای آن قرار می دهیم. سپس کل جعبه را با مولکولهای آب با چگالی gr/ml 1 پر می کنیم بطوری که گرافن و پروتئین در داخل آب قرار می گیرند. تعداد اتم های کربن گرافن ۱۰۰۸ است و تعداد اتم های این پروتئین کوچک ۱۴۳ و همچنین تعداد مولکولهای آب در حدود ۶۰۰۰می باشد. در کل، این شبیه سازی تعداد ۱۹۱۵۱ اتم دارد. در این شبیه سازی، اتم های کربن در گرافن بار جزیی ندارند، این به این دلیل است که بار جزیی موجود در روی اتم کربن خیلی کوچک بوده و دائماً در حال تغییر است.در نتیجه و با توجه به اینکه نیروی کولنی ایجاد شده توسط این بارهای کوچک در مقایسه با نیروی واندروالسی کربن کوچک است، نادیده گرفته شد. برهمکنش داخلی بین اتم های کربن در گرافن با پتانسیل ترسوف مدل شده است. این پتانسیل سه جسمی است و برای سیستم های کوالانی مناسب تشخیص داده شده است. گرافن نیز دارای پیوندهای بین اتمی کوالانی می باشد. برهمکنش بین اتمی برای پروتئین در نظر گرفته شده با کد۲OTQ و همچنین بین اتم های آب را با میدان نیروی چارم مدل کرده ایم. مدل آب استفاده شده در این کار TIP3P بوده است که از پارامترهای میدان نیرو بهره می گیرد. برهمکنش دیگری که باید در نظر گرفت مربوط به برهمکنش گرافن با بقیه سیستم (شامل آب و پروتئین) است. این برهمکنش بدلیل نداشتن بار جزیی روی اتم های گرافن، فقط پتانسیل لنارد-جونز خواهد بود. بدین منظور ما بایستی ضرایب پتانسیل را برای اتم کربن گرافن داشته باشیم. برای این موضوع، ما از ضرایب لنارد-جونز اتم کربن حلقه فنیل در اسید آمینه فنیل آلانین همانطور که در (شکل ۵-۲):نشان داده شده است، استفاده کردیم.
(شکل ۵-۲): اتم کربن حلقه ی فنیل
دلیل این کار این است که، اتم کربن روی حلقه فنیل همانند کربن روی گرافن با سه اتم کربن در تماس است و شرایط آنها یکی است. بنابراین با دقت قابل توجه همان ضرایب لنارد-جونز برای اتم کربن گرافن نیز قابل استفاده است.
پارامترهای لنارد جونز برای کربن بصورت و می باشد.
پروتئینی را استفاده کرده ایم که پروتئین ضد میکروب می باشد و دارای توالی رزیجو های زیر می باشد.
ID : 2OTQ {ARG، ARG، TRP، PHE، TRP، ARG}
در ابتدا سیستم را با حضور آب بررسی می کنیم. این سیستم همانند سیستم بدون حضور آب است چه از نظر برهمکنش ها و چه از لحاظ پیکربندی اولیه. بنابراین هر توضیحی درباره نحوه شبیه سازی برای سیستم با حضور آب و سیستم بدون حضور آب یکسان خواهد بود. همه ی شبیه سازی ها با بهره گرفتن از بسته رایگان انجام شده است.
حال برای به تعادل رساندن دمای سیستم، آن را درآنسامبل همراه با دینامیک لانژون قرار می دهیم. سیستم در مدت زمان به تعادل گرمایی می رسد. سپس سیستم را برای تحول در آنسامبل قرار می دهیم. این آنسامبل برای کنترل فشار و دما از الگوریتم بهره میگیرد. دما را ۳۰۰ کلوین و فشار را یک اتمسفر انتخاب می کنیم تا شرایط آزمایشگاه را بتوانیم ایجا کنیم. گام زمانی را یک فمتوثانیه در نظر گرفتیم. در شرایط دمای ۳۰۰ کلوین و فشار ۱ اتمسفر سیستم به اندازه ۵۰ پیکوثانیه حرکت می کند تا فشار و دما به این مقدار برسند، سپس سیستم به اندازه۲ns با همین شرایط متحول می شود. داده ها را هر ۱۰۰۰ گام ذخیره و بعنوان نتیجه آورده خواهد شد. کمیت هایی که اندازه گرفتیم: فاصله متوسط پروتئین از گرافن، انرژی واندروالسی برهمکنشی بین پروتئین و گرافن برحسب زمان وارتفاع ، آبدوستی و آبگریزی اسیدهای آمینه پروتئین، شعاع ژیراسیون پروتئین بر حسب زمان، مساحتی که پروتئین بیشترین زمان را روی گرافن می گذارد.
۵-۳-نتایج شبیه سازی
حرکت خود به خودی پروتئین به سمت مرکز گرافن با بهره گرفتن از شبیه سازی دینامیک مولکولی مشاهده گردید.(شکل۵-۳): پیکربندی اولیه سیستم در لحظه و (شکل ۵-۴):پیکربندی سیستم در زمان را نشان می دهد.
(شکل۵-۳):حالت اولیه سیستم شبیه سازی بعد از تعادل گرمایی
(شکل۵-۴): حالت نهایی سیستم شبیه سازی در
برای اینکه تصاویر واضح باشند مولکول های آب نشان داده نشده اند. کمیت هایی مانند دما، فشار، انرژی و چگالی که در این برهمکنش محاسبه شده اند درستی شبیه سازی و به تعادل رسیدن آن را بیان می کند .
۵-۳-۱- نوسانات دما بر حسب زمان شبیه سازی
از جمله کمیت هایی که در هر شبیه سازی به آن توجه می شود دما می باشد. دما در شبیه سازی های دینامیک مولکولی حول مقدار متوسط خود که در اینجا ۳۰۰ کلوین است، نوسان می کند. افت و خیز دما با توجه به مکانیک آماری با تعداد اتم های سیستم کاهش می یابد. نمودار۵-۱ دما بر حسب زمان در محیط آبی می باشد. همانطور که از شکل دیده می شود حداکثر افت و خیز دما بصورت است. معمولاً افت و خیز دما در یک شبیه سازی دما ثابت کم و در همین حدود می باشد.
(نمودار۵-۱): دما بر حسب زمان در محیط آبی
(نمودار۵-۲) دما بر حسب زمان در محیط بدون آب می باشد. همانطور که در توضیح شکل دیدیم، افت و خیز دما برای سیستمی که دارای تعداد اتم های کمی باشد زیاد خواهد بود. چون شکل زیر برای سیستم بدون آب است بنابراین تعداد اتم های موجود در سیستم نسبت به سیستم با آب کمتر و در نتیجه افت و خیزهای دما بیشتر است. همانطور که از شکل دیده می شود حداکثر افت و خیز دما بصورت است.

(نمودار۵-۲): دمابرحسب زمان در محیط بدون آب
۵-۳-۲-نوسانات فشار حول مقدار متوسط یک اتمسفر
از دیگر کمیت های مهم فشار می باشد. در اینجا فشار حول مقدار متوسط یک اتمسفر در حال نوسان می باشد. نمودار۵-۳ مربوط به محیط آبی می باشد. فشار یک اتمسفر از این جهت در نظر گرفته شده است که شرایط آزمایشگاه را ارضا کند. همانطور که مشاهده می شود فشار دارای افت و خیز زیادی نسبت مقدار متوسط خود است، برعکس دما که نسبت به متوسط خود از نوسانات کمی برخوردار بود. در یک شبیه سازی دینامیک مولکولی، افت و خیز فشار زیاد بوده ولی مهم آن است که مقدار میانگین آن در یک بازه زمانی نسبتاً بلند به مقدار ۱ اتمسفر برسد. فشار منفی در این نمودار به این معنی است که سیستم در آن زمان به طرف داخل جعبه شبیه سازی رمبیده می شود و فشار مثبت نیز به معنی معمول آن می باشد. همانطور که مشاهده می شود نوسانات فشار بصورت می باشد.
(نمودار۵-۳): فشار بر حسب زمان در محیط آبی
۵-۳-۳- نوسانات چگالی سیستم در طول زمان شبیه سازی
یکی از نشانه های به تعادل رسیدن سیستم تعادل چگالی می باشد. چگالی آب خالص در حدود می باشد. وجود گرافن و پروتئین در سیستم بدلیل تعداد اتم های کم آنها در مقایسه با تعداد اتم های آب روی چگالی تاثیر محسوسی نگذاشته است. در محیط بدون آب چون آب وجود نداشت پس این کمیت دارای اهمیت نمی باشد. می توان از این نمودار نتیجه گرفت که برای شبیه سازی اینگونه سیستم ها که دارای مولکولها غیر زیستی نیز هستند چگالی اولیه سیستم را در حدود چگالی آب در نظر بگیریم. البته باید برای رسیدن سیستم به چگالی واقعی، سیستم را در آنسامبلNPT قرار دهیم تا با کوچک و یا بزرگ شدن حجم جعبه، به چگالی واقعی برسیم.
(نمودار۵-۴): چگالی بر حسب زمان در محیط آبی
۵-۳-۴-تغییرات شعاع ژیراسیون پروتئین
برای مولکول های بزرگ مانند پروتئین ها و دی ان ای ها کمیت مهمی به نام شعاع ژیراسیون تعریف می شود، که ما در اینجا تغییرات آن را مورد بررسی قرار داده ایم. شعاع ژیراسیون با رابطه زیر داده می‌شود:
(۵-۱):
که در آن و به ترتیب محل و جرم اتم ام پروتئین می باشد. و هم بترتیب مرکز جرم جرم کل پروتئین است. این شعاع می تواند معیاری از باز و بسته شدن پروتئین باشد. هر جا که این شعاع بزرگ باشد پروتئین باز شده است و هر جا که شعاع ژیراسیون کوچک باشد پروتئین جمع شده است. نمودار۵-۵ تغییرات شعاع ژیراسیون بر حسب زمان را نشان می دهد.
با توجه به نمودار، پروتئین در بازه ی زمانی ۲۰۰ تا ۱۲۰۰پیکوثانیه که به سمت گرافن در حرکت است دارای تغییرات در شعاع ژیراسیون کمی است، این به این معنی است که پروتئین حالت قبلی خود را حفظ کرده است. ولی در بازه زمانی ۱۲۰۰تا ۱۸۰۰پیکوثانیه شعاع ژیراسیون افزایش می یابد یعنی در این بازه پروتئین رفته رفته بازتر شده و سطحش بزرگتر و پهن تر می شود. دلیل اینکه پروتئین تمایل دارد پهن تر شود این است که وقتی اتم های پروتئین به گرافن نزدیکتر می شوند آنگاه انرژی واندوالسی برهمکنشی بین گرافن و پروتئین در کمینه مقدار خودش قرار میگیرد. پس می توان نتیجه گرفت که پروتئین با کاهش انرژی واندروالسی خود، می تواند گرافن دوست تلقی شود. این یک قاعده کلی است، مولکولهایی که مولکول دیگری را دوست دارند، تمایل دارند با مولکول دیگر با بیشترین سطح در تماس باشند. همانطور که از شکل پیداست حضور گرافن در این سیستم باعث افزایش شعاع ژیراسیون از به شده است. همانطور که می دانیم کارکرد پروتئین ها بر اساس شکل سه بعدی (فضایی) آنها شکل می گیرد، بدین معنی که اگر شکل فضایی پروتئین تغییر کند آن پروتئین کارایی خود را از دست خواهد داد. این نکته در اینجا لازم است بیان شود که در اینجا با افزایش شعاع ژیراسیون شکل سه بعدی آن تغییر می کند و اگر این تغییر شکل به اندازه کافی زیاد محسوب شود آنگاه کارایی پروتئین از بین برود. در صورت اثبات آزمایشگاهی این موضوع، این مقدار تغییر شکل پروتئین بر کارایی آن اثر می گذارد، می توان از آن بعنوان مولکول خطرناک یاد کرد. چرا که اگر وارد بدن موجود زنده ای شود می تواند پروتئین های آنها را بخود جذب کرده و باعث از بین بردن کارایی آن پروتئین ها گردد. ( آزمایش تجربی این موضوع می تواند در آینده در ادامه موضوع این پایان نامه تعریف شود).
(نمودار۵-۵): تغییرات شعاع ژیراسیون بر حسب زمان در محیط آبی
نمودار(۵-۶ )تغییرات شعاع ژیراسیون در محیط بدون آب می باشد. در اینجا نیز شعاع ژیراسیون رفته رفته بیشتر شده است. در اینجا چون آب وجود ندارد هیچ نیرویی از اطراف به اتم های پروتئین وارد نمی شود و بنابر این پروتئین براحتی و حتی قبل از اینکه کاملاً به نزدیکی گرافن برسد شروع به افزایش شعاع ژیراسیون می کند ولی بیشترین مقدار افزایش شعاع هنگامی است که به گرافن چسبیده باشد. در اینجا نیز همانند مورد قبل (در حضور آب) شعاع به مقدار افزایش یافته است.
(نمودار۵-۶): تغییرات شعاع ژیراسیون در محیط بدون آب
۵-۳-۵-بررسی انرژی واندروالسی
با توجه به نمودار۵-۷ با کاهش فاصله متوسط پروتئین از گرافن انرژی برهمکنشی واندروالسی کاهش می یابد. همانطور که می بینیم رابطه بین این دو خطی نیست. این بخاطر آن است که رابطه مربوط به انرژی واندوالسی با فاصله خطی نیست. البته در این نمودار، انرژی برهمکنشی تمام اتم های پروتئین را با گرافن در نظر گرفته شده که مسلما همه اتم ها در یک فاصله از گرافن قرار ندارند. بنابراین تابع آن نیز بصورت توان۶ و توان ۱۲ فاصله نخواهد بود. نوسانات اتم ها و اسید آمینه ها باعث می شود که نمودار دارای نوسان باشد. رفتار کلی که در این نمودار دیده می شود این است که با کاهش فاصله متوسط پروتئین از گرافن، انرژی واندروالسی نیز کاهش می یابد. کاهش انرژی در یک فاصله ۱۲آنگسترومی نشان از قید این پروتئین به گرافن است.
(نمودار۵-۷): کاهش ارتفاع بر حسب کاهش انرژی برهمکنشی واندروالسی
تحول انرژی برهمکنشی واندروالسی را بر حسب زمان نیز می توان بررسی کرد. از شکل( ۵-۸ )پیداست که این انرژی بجز اول در بقیه زمان ها با شیب نسبتاً کمی کاهش پیدا می کند. در نهایت این کاهش انرژی متوقف می شود که آن نقطه بعنوان چاه انرژی برای پروتئین در نظر گرفته می شود.
(نمودار۵-۸): تغییرات انرژی برهمکنشی واندروالسی بر حسب زمان
۵-۳-۶-فاصله پروتئین و گرافن بر حسب زمان
این نمودار تحول زمانی فاصله بین گرافن و پروتئین را نشان می دهد. از نمودار دیده می شود که پروتئین در حدود ۴۰۰ فمتو تانیه خود را به گرافن رسانده است در حالی که انرژی واندروالسی در این مدت به کمینه مقدار خود نرسیده است. دلیل این موضوع را می توان در این نکته دید که هر چند پروتئین در مدت کوتاهی خود را به گرافن رسانده است ولی این زمان برای پروتئین جهت بازآرایی و تغییر شعاع ژیراسون کم است و در این مدت نمی تواند روی سطح گرافن پهن شود. برای تغییر شعاع ژیراسیون و در نتیجه آن کاهش انرژی واندر والسی به مدت زمان بیشتری لازم است.
(نمودار۵-۹): تغییرات فاصله پروتئین بر حسب زمان
همانطور که مشاهده می شود دو نمودار اخیر مشابه هم می باشند البته باید شبیه هم باشند و همانطور که می بینیم در هر دو انرژی واندروالسی کاهش می یابد. بالا رفتن اولیه نمودار به خاطر بنزن های پروتئین می باشد که خیلی سریع بالا می روند. پروتئین دارای اسید آمینه های آبدوست و آبگریز است. اسید آمینه های آبدوست وقتی در قسمت زیرین پروتئین که به سمت گرافن است قرار می گیرد، دوست دارد به نحوی خود را از گرافن دور کند و به آن سمت دیگر رود که در آن سمت دیگر در کنار مولکولهای آب باشد. این طبیعت اسید آمینه های آبدوست باعث می شود که پروتئین در نزدیکی سطح گرافن ( در بازه زمانی تا ) افت و خیز کند تا حالت پایدار خود را پیدا کند.
۵-۳-۷-تغییرات فاصله اسید آمینه ها و گرافن بر حسب زمان
کمیت دیگری که در اینجا مورد بررسی قرار می گیرد آبدوستی و آبگریزی اسیدهای آمینه در مقایسه با یکدیگر است. به همین منظور فاصله اسیدهای آمینه را از سطح گرافن محاسبه می کنیم. ملاک برای تشخیص آبدوستی و آبگریزی، فاصله از سطح گرافن است. چرا که اگر اسید آمینه در بیشترین فاصله از گرافن قرار بگیرد یعنی تمایل دارد کنار مولکولهای آب باشد تا کنار صفحه گرافن. همین طور برعکس، اگر اسید آمینه ای نزدیک صفحه گرافن باشد پس دوست دارد دور از مولکولهای آب باشد یعنی آبگریز محسوب می شود. با توجه به نمودار، می توان گفت فنیل آبگریز بوده چرا که در نهایت فاصله آن از سطح گرافن از همه کمتر است. که در حال نزدیک شدن می باشد. اسید آمینه ای که با رزیجو آرگ می باشد کاملاً دور شده پس آبدوست می باشد و به همین ترتیب در مورد بقیه رزیجو ها هم می شود نظر داد. در مورد آرجینین نمی توان گفت آبدوست است یا آبگریز. چرا که در فاصله بین آبگریزی و آبدوستی واقع شده است. متاسفانه این پروتئین دارای تعداد زیادی اسید آمینه نیست که بتوان در مورد اسید آمینه با بهره گرفتن از فاصله آنها تا سطح اظهار نظر کرد. مثلا تریپتوفان هم در نزدیکترین فاصله قرار دارد و هم در بیشترین فاصله که نمی توان در مورد آن قضاوت کرد. ولی اگر تعداد اسید آمینه های پروتئین بیشتر می بود می توانستیم تعداد اسید آمینه هایی که به سطح نزدیکترند را با آنهایی که دورترند مقایسه کنیم آنگاه معیار ما خود را بهتر نشان می داد.
(نمودار۵-۱۰): فاصله اسید آمینه ها از سطح گرافن بر حسب زمان
۵-۳-۸- بررسی حرکت پروتئین بر روی سطح گرافن
در این حالت کمیت X میانگین وYمیانگین تمام اتم های پروتئین را در نظر می گیریم. بررسی می کنیم که در هر گام زمانی پروتئین در چه قسمتی از گرافن قرار دارد. به این منظور یک نمودار ۵۰در ۵۰ را بعنوان نماینده ای از گرافن که دارای ابعاد ۵۰در ۵۰ می باشد را در نظر می گیریم. با توجه به شکل، پروتئین بیشتر در فضای بالای قسمت مرکزی گرافن حرکت می کند. این به این معنی است که گرافن دوست ندارد به سمت لبه ها حرکت کند چرا که در این صورت با تعداد اتم های کمتری از گرافن بر همکنش می کند و باعث می شود انرژی واندروالسی افزایش پیدا کند. چون این موضوع در حرکت خود به خودی نامطلوب است پس اتفاق نمی افتد. اگر به فیلم مربوط به شبیه سازی توجه کنیم می بینیم که پروتئین در این حالت نسبت به حالت بدون آب کمتر حرکت می کند و این به خاطر وجود محیط آبی می باشد که مولکول های آب اجازه حرکت بیشتر را نمی دهند. نمودار( ۵-۱۱) نشان می دهد که ضریب پخش پروتئین در حضور آب در سطح گرافن کمتر از زمانی است که آب وجود ندارد.
(نمودار۵-۱۱): مسیر حرکت پروتئین در فضای بالای گرافن در حضور آب
(نمودار۵-۱۲): نمودار مربوط به این بررسی در محیط بدون آب می باشد
پروتئین در این محیط حرکت بیشتری را از خود نشان می دهد چون در این محیط آب وجود ندارد پس طبیعی به نظر می رسد که با توجه به کم شدن تعداد مولکول ها در محیط، پروتئین آزادی حرکت بیشتری را داشته باشد و در مقایسه با حالت قبلی در سطح بیشتری از گرافن حضور داشته باشد. این گونه حرکت و همچنین کاهش انرژی واندوالسی نشان می دهد که پروتئین به گرافن مقید شده است و برای اینکه پروتئین از گرافن جدا شود باید یک نیروی خارجی اعمال گردد. همچنین اگر پروتئین در یک طرف گرافن باشد هیچگاه نخواهد توانست بصورت خود به خودی از آن جدا شود و یا به طرف دیگر گرافن حرکت کند.

بسیار بلند تر

غیر نرمال

ساعات کل آموزش فرد

.۰۸۰

چوله اندک به راست

.۰۶۹

اندکی بلند تر

غیر نرمال

متغیر آموزش کارکنان (کل ساعات آموزش):
این متغیر به ساعات آموزش کارکنان اشاره دارد. حداقل این عدد برای کارکنان دانشگاه کاشان صفر ساعت و حداکثر ۱۲۲ ساعت بوده است. میانگین ساعات آموزش کارکنان دانشگاه کاشان ۹۵/۳۴ می باشد. میزان چولگی داده ها (۰.۰۸۰) حاکی از چولگی اندک به راست بوده و میزان کشیدگی داده ها (۰.۰۶۹) حاکی از بلندتر بودن اندک داده ها نسبت به توزیع نرمال می باشد.

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

در مجموع توزیع این متغیر تا حدی غیرنرمال می باشد. میانگین حدود ۳۵ ساعت آموزش برای یک سازمان آموزشی مثل دانشگاه، چندان مطلوب نمی باشد. (این موضوع را می توان در نمودار زیر مشاهده کرد.)
نمودار ۴-۱۰: توزیع فراوانی متغیر ساعات آموزش کارکنان دانشگاه کاشان
متغیر آموزش عمومی:
این متغیر به ساعات آموزش عمومی کارکنان اشاره دارد. حداقل این عدد برای کارکنان دانشگاه کاشان صفر ساعت و حداکثر ۹۰ ساعت بوده است. میانگین ساعات آموزش عمومی کارکنان دانشگاه کاشان ۸۹/۱۹ ساعت می باشد. میزان چولگی داده ها (۰.۱۸۰-) حاکی از چولگی اندک به چپ بوده و میزان کشیدگی داده ها (۰.۳۵۹) حاکی از بلندتر بودن اندک داده ها نسبت به توزیع نرمال می باشد. در مجموع توزیع این متغیر غیرنرمال بوده و تمایل داده ها به سمت ساعات آموزش کمتر بیشتر بوده است. میانگین حدود ۲۰ ساعت آموزش برای یک سازمان آموزشی مثل دانشگاه، چندان مطلوب نمی باشد. (این موضوع را می توان در نمودار زیر مشاهده کرد.)
نمودار ۴-۱۱
متغیر آموزش تخصصی:
این متغیر به ساعات آموزش تخصصی کارکنان اشاره دارد. حداقل این عدد برای کارکنان دانشگاه کاشان صفر ساعت و حداکثر ۸۰ ساعت بوده است. میانگین ساعات آموزش تخصصی کارکنان دانشگاه کاشان ۹۷/۱ ساعت می باشد. میزان چولگی داده ها (۶.۴۱۶) حاکی از چولگی بسیار به راست بوده و میزان کشیدگی داده ها (۵۸.۲۸) حاکی از بلندتر بودن بسیار داده ها نسبت به توزیع نرمال می باشد. در مجموع توزیع این متغیر غیرنرمال بوده و تمایل داده ها به سمت ساعات آموزش کمتر بیشتر بوده است. میانگین حدود ۲ ساعت آموزش برای یک سازمان آموزشی مثل دانشگاه، بسیار نامطلوب می باشد. (این موضوع را می توان در نمودار زیر مشاهده کرد.)
نمودار ۴-۱۲
متغیر آموزش فرهنگی، اجتماعی:
این متغیر به ساعات آموزش فرهنگی، اجتماعی کارکنان اشاره دارد. حداقل این عدد برای کارکنان دانشگاه کاشان صفر ساعت و حداکثر ۳۴ ساعت بوده است. میانگین ساعات آموزش فرهنگی اجتماعی کارکنان دانشگاه کاشان ۹۹/۱۲ ساعت می باشد. میزان چولگی داده ها (۰.۱۷۴) حاکی از چولگی اندک به راست بوده و میزان کشیدگی داده ها (۱.۰۶۶-) حاکی از کوتاه تر بودن بسیار داده ها نسبت به توزیع نرمال می باشد. در مجموع توزیع این متغیر تا حدی غیرنرمال بوده و تمایل داده ها به سمت مرکز بیشتر بوده است. میانگین حدود ۱۳ ساعت آموزش فرهنگی اجتماعی برای یک سازمان آموزشی مثل دانشگاه، چندان مطلوب نمی باشد. (این موضوع را می توان در نمودار زیر مشاهده کرد)
نمودار ۴-۱۳
متغیر آموزش مدیریتی:
این متغیر به ساعات آموزش مدیریتی کارکنان اشاره دارد. حداقل این عدد برای کارکنان دانشگاه کاشان صفر ساعت و حداکثر ۶ ساعت بوده است. میانگین ساعات آموزش مدیریتی کارکنان دانشگاه کاشان ۱۵۵/۰ ساعت می باشد. میزان چولگی داده ها (۶.۰) حاکی از چولگی بسیار زیاد به راست بوده و میزان کشیدگی داده ها (۳۴.۲۰۰) حاکی از بلندتر بودن بسیار داده ها نسبت به توزیع نرمال می باشد. در مجموع توزیع این متغیر غیرنرمال بوده و تمایل داده ها به سمت ساعات آموزش کمتر بیشتر بوده است. میانگین کمتر از یک ساعت آموزش مدیریتی برای یک سازمان آموزشی مثل دانشگاه، بسیار نامطلوب است. (این موضوع را می توان در نمودار زیر مشاهده کرد.)
نمودار ۴-۱۴ توزیع های فراوانی محورهای ساعات آموزش کارکنان دانشگاه کاشان
نکته دیگر، ترکیب انواع آموزشها می باشد. همانطور که در جدول زیر مشاهده می شود از مجموع ۱۲۱۶۳ ساعت آموزش تمامی کارکنان دانشگاه کاشان، ۵۶.۲ درصد به آموزشهای عمومی و ۳۷.۲ درصد به آموزشهای فرهنگی اجتماعی بر می گردد. سهم اندک حدود ۵ درصدی آموزشهای مدیریتی و تخصصی برای دانشگاه کاشان بسیار نامطلوب بار است.نکته دیگر درصد کارکنانی از دانشگاه هستند که اصلا هیچ آموزشی ندیده اند. همانطور که در جدول زیر مشخص است ۱۵.۵ درصد از کارکنان دانشگاه اصلا هیچ آموزشی را در سال ۱۳۹۲ ندیده اند و این نیز امری بسیار نامطلوب است. این موضوع وقتی حاد تر می شود که حدود ۸۲.۵ درصد از کارکنان اصلا هیچ آموزش تخصصی مرتبط با شغل خود و نیز ۹۷.۴ درصد کارکنان، هیچ دوره آموزش مدیریتی ندیده اند.
جدول (۴-۹): اطلاعات توصیفی دیگر مربوط به متغیر آموزش کارکنان

انواع آموزش

جمع ساعات آموزش

درصد ساعات آموزش از کل

تعداد
افرادفاقد آموزش

درصد
افراد فاقد آموزش

آموزشی عمومی

۶۸۳۰

۵۶.۲%

۸۱

۲۳.۳%

آموزشی تخصصی

۴‚۱. فرضیات تحقیق
با توجه به جایگاه خاصّ دعا در سیره حضرت و اینکه به عنوان شخص بسیار دعا کننده شناخته شده اند^[۱۹]؛ و حتی در میان معصومین ( علیهم السلام ) سیره عبادی حضرت به عنوان الگو و معیار مطرح بوده است و حتی حضرت زین العابدین ( علیه السلام ) عبادت خود را با امیرالمومنین( صلوات الله علیه) می سنجند^[۲۰].
با بررسی فرمایشات حضرت در نهج البلاغه و دیگر کتب حدیثی می توان گفت حضرت نیاز به دعا را یک نیاز فطری می دانند ، با توجه به مجموع روایاتی که در جوامع روایی ( عمدتا شیعه ) از زبان حضرت نقل شده و در آنها به جایگاه و فلسفه دعا ( فقر و جهل ذاتی انسان ، حوادث و…) شرایط ،آداب ، ملزومات( زمان های عام و خاص ، مکان های دعا و اجابت آن ،حالت بدن )موانع استجابت دعا ( معرفتی و عملی ) و … اشاره شده است .
معیار های بیرونی : ، سبک ادبی دعا ، سرآغاز دعا ، شکل بیان ( ملفوظ ، مکتوب) ، خاستگاه ادعیه ، گونه شناسی آداب و اعمال همراه دعا ، مکان دعا ، زمان دعا و … معیارهای درونی : محتوای ادعیه ، جایگاه گوینده ، گونه شناسی آیات و سوره های بکار رفته در ادعیه و فراوانی آنها ، و …
۵‚۱. ضرورت و اهداف تحقیق
در بین امامان معصوم علیهم السلام دوران زندگی امیر بیان علی ( علیه السلام ) منحصر به فرد بوده و ما با انبوهی از مسائل و مشکلات متنوع روبرو هستیم که در زندگی هر کدام از معصومین فقط بخشی از آن دیده می شود : حوادث آغاز رسالت نبوی ، هجرت به مدینه ، سپهسالاری حضرت در غزوات نبوی ، کاتب قرآن ، حوادث بعد از رحلت پیامبر اکرم ، مخالفت و دشمنی قریش و برخی از اصحاب با ایشان ، جنگهای جمل ، صفین و نهروان ، شئون و اقتضاآت مقام خلیفه و …
فارغ از جمع آوری ادعیه حضرت در قرون نخستین که کتب مربوط به دست ما نرسیده است، در قرون اخیر برخی از علما به جمع آوری ادعیه حضرت و ارائه آن به عنوان صحیفه های علویه ثانیه و جامعه و صحیفه امام علی ( علیه السلام ) پرداخته اند و معیار دسته بندی و ترتیب بیان ادعیه بر اساس محتوا، عنوان و از یک جهت خاصی بوده است که ضرورت پژوهشی نو را ایجاب می کند .
هدف اصلی در این پژوهش ، در مرحله نخست شناخت سیره و بیان امیرالمومنین علی ( علیه السلام ) نسبت به « دعا » و واژه های مرتبط است که در ادعیه و سخنان حضرت وجود دارد ؛ گاه این سخنان و سیره به صورت مستقیم از خود حضرت نقل شده و گاهی ( اکثر اوقات ) در ضمن سخنان امامان معصوم ( علیهم السلام ) و اصحاب ایشان بیان شده است .
در مرحله دوم گونه شناسی ( طبقه بندی ) ادعیه حضرت با معیارهای مختلف و نمایش نموداری فراوانی و هم پوشانی ادعیه نسبت به هر گونه ارائه می شود .
البته کتابهایی که پیرامون معرفی حضرت می باشند یا شکل موسوعه ، دانشنامه دارند در بخشی از سیره عملی حضرت به مبحث دعا و ادعیه نقل شده از حضرت به فراخور بحث و دیدگاه مولف پرداخته می شود .
نکته دیگر اینکه در مقدمه صحیفه های نوشته شده حتی یک روایت پیرامون جایگاه دعا در سیره حضرت نقل نشده است^[۲۱] و نقل روایات حضرت پیرامون دعا ، فلسفه ، آداب و بایسته های دعا و … مغفول مانده است .
به فضل الهی در این نوشتار برآنیم تا بر اساس معیارهای مختلف ادعیه حضرت را مورد بررسی قرار دهیم.از آنجا که منبع اصلی تحقیق توسط یکی از صاحب نظران علوم اسلامی جمع آوری شده است، از بررسی صحت سند و اعتبار ادعیه خودداری شده و به تحلیل و طبقه بندی ادعیه پرداخته شده است.
۶‚۱. پیشینه تحقیق
در مورد پیشینیه این تحقیق با بررسی و تتبعی که انجام شد، می توان گفت با عنوان گونه شناسی دعا و بیانات حضرت آن مقدار که مقاله ، پایان نامه و کتاب جستجو شد، تاکنون تحقیقی بدین شکل سامان نیافته است و در شروح مختلف نهج البلاغه به فراخور موضوع و هدف شارح به بحث از دعا و شرح ادعیه منقول از حضرت در نهج البلاغه پرداخته شده و هر کس طبق مذاق مذهبی ، فکری ، علمی و … شده است . ادعیه معروف حضرت مانند : دعای کمیل ، دعای صباح ، مناجات شعبانیه توسط شارحان مختلف شرح و بیشتر به تبیین معارف موجود در دعا و لغت شناسی پرداخته اند .
کتابها
صحیفه علویه عبدالله بن صالح سماهیجی، الصحیفه العلویه الثانیه : تالیف محدث شهیر میرزا حسین نوری(م۱۳۲۰ق) ، الصحیفه العلویه الثالثه : سید مهدی غریفی بحرانی نجفی، صحیفه امام علی (ع) : تالیف جواد قیومی اصفهانی، الصحیفه العلویه الجامعه: تالیف سید محمد باقر موحد ابطحی اصفهانی، مسند الامام علی(ع)ج دوم: تالیف سید حسن قبانچی با همکاری سید طاهر سلامی ، نهج السعاده فی مستدرک نهج البلاغه ج ششم : تالیف محمد باقر محمودی، موسوعه سیره اهلبیت (علیهم السلام) ج پنج تالیف محمد باقر قریشی، دعاهای نهج البلاغه نوشته عباس بهروزی سال ۱۳۶۱ ، دعا در نهج البلاغه نوشته علیرضا فولاد گر ، در مجوعه آثار حضرت آیت الله جوادی آملی به فراخور بحث به بخش هایی از این موضوع پرداخته شده است. شروح مختلف بر: دعای کمیل، مناجات شعبانیه، دعای صباح و … در قرون مختلف.
پایان نامه ها
« دعا از دید گاه امام علی علیه السلام نوشته : اعظم بختی نژاد سال ۱۳۸۲ » ، «رابطه نیایش های نهج البلاغه با حوادث سیاسی ، اجتماعی و اوضاع فرهنگی دوران خلافت حضرت علی علیه السلام نوشته : زینب السادات علمدار نیارکی سال ۱۳۸۷ » ، « عرفان در دعاهای مولی الموحدین امیر المومنین حضرت امام علی علیه السلام نوشته عباس محبی سال ۱۳۸۴ » ، « دعا در نهج البلاغه نوشته سید عباس میر صادقی، پیام نور تهران، سال ۱۳۸۵ » ، ، پایان نامه «گونه شناسی تالیفات دعایی عالمان مسلمان تا زمان ابن طاووس : فرهنگ مهروش » . ملیحه فرد‌حسینی، پایان نامه «بررسی صدور و تحلیل مضامین ادعیه ماه شعبان براساس “مصباح المتهجد” شیخ طوسی»، « خاستگاه قرآنی دعاهای نهج البلاغه، سید احمد حسینی، دانشکده علوم حدیث»
مقالات
«دعا در نهج البلاغه» نوشته محسن خندان نشریه مسجد^[۲۲] ، ‌دانشنامه‌امام‌علی(ع)جلد چهارم ( اخلاق و سلوک ) مقاله دعا نوشته على نصیرى، ‌دانشنامه‌امام‌علی(ع)جلد دوازدهم( مرجع شناسی)، صحیفه علویه، نوشته على صدرایى خویى، « تحلیل محتوای ادعیه رضویه» محمد جانی پور. عباس تقویان ، پیرامون موضوعات دیگر مانند : پیرامون روایات تفسیری دو مقاله گونه شناسی روایت تفسیری امام موسی کاظم نوشته : بی بی سادات رضی بهابادی و معصومه علی بخشی ، گونه شناسی روایت تفسیری امام رضا (علیهما السلام ) نوشته عباس مصلایی پور یزدی محسن دیمه کارگراب ، گونه شناسی روایات مهدوی و … نوشته شده است .
۷‚۱.روش تحقیق
ادعیه و روایات حضرت از صحیفه علویه و نهج البلاغه، غررالحکم و دیگر منابع، نهج الدعا، نهج الذکر و جامع الاحادیث دعا جمع آوری و ترتیب بندی شده است؛ در صورت عدم وجود سلسله و شان صدور روایت یا دعا غالبا به اولین مصدر نقل روایت یا دعا مراجعه شده است.
۸‚۱. مفاهیم
بررسی مفهومی واژگان موضوع تحقیق، نخستین گام تحقیق است لذا در ابتدا به مفاهیم اصلی تحقیق که در عنوان و موضوع پایان نامه ذکر شده است می پردازیم.
۱‚۸‚۱.مفهوم گونه شناسی
گونه شناسی (Typology) از ریشه یونانی به معنای « مُدل»، « چهره»، «گونه» و پسوند « گفتار» گرفته شده است. گونه شناسی «فنّ» یا به عبارت بهتر «هنری» است که امکان تعیین گونه ها را فراهم می سازد و عملی است فکری شامل: تعیین طرح کلی، مُدل یا صفات و مشخصه غالب^[۲۳] و یک روش طبقه بندی است که در آن هر طبقه حول یک مثال یا یک نمونه خاص شکل گرفته است ؛ هر عضو گردآوری شده با نمونه آن مقایسه می شود و بر پایه این مقایسه بر حسب میزان شباهت نمونه در یک رده خاص قرار می گیرد ؛ ویژگی های اصلی گونه شناسی عبارت است از : ساخت ، تعیین فضای خاص و جدا سازی .
مراد از گونه شناسی، شناخت گونه های مختلف یک پدیده و به بیانی دقیق تر، طبقه بندی روشمند پدیده هایی است که به یک خانواده و مجموعه وابسته هستند و در مقایسه و نسبت سنجی با دیگر اعضای این مجموعه، در یک یا چند ویژگی، وجه مشترک دارند و در وجوه دیگر با هم متفاوت هستند، گونه شناسی یعنی مشخص ساختن اشتراک ها و افتراق ها بر اساس یک معیار خاص عینی یا ذهنی، این فرایند را گونه بندی یا طبقه بندی نیز می نامند.
«تکنیک گونه شناسی» کم و بیش در بخش هایی از علم منطق، به ویژه در مبحث تحلیل و تقسیم مورد توجه حُکمای مسلمان بوده است.جرجانی در کتاب التعریفات^[۲۴] تقسیم را افزودن قیدهای مختلف به یک شیء، به گونه ای که از هر کدام از آنها یک قِسم (گونه) پدید آید، تعریف کرده است. همین تعریف مورد پذیرش ملاصدرا^[۲۵] بوده و وی آن را به معنای افزودن قیود مختلف به مُقسمِ واحد، تفسیر و بکار برده است.
نکته دیگر اینکه تقسیم در دانش منطق نزد مسلمانان، یک فرایند و عملیات ذهنی است. به این معنا که یک اندیشمند موضوعی را به مثابه مقسم در نظر می گیرد. و با افزودن قیدهای مختلف، خود آن را به گونه های مختلف تقسیم می کند، صرف نظر از اینکه آیا این گونه جدید، وجود خارجی دارد یا نه، یا کسی باور دارد یا نه.با توجه به آنچه ذکر شد می توان پذیرفت گونه شناسی یکی از بهترین روش ها برای شناخت اجزاء، ابعاد و اطراف یک پدیده، تمیز، تفکیک پدیده ها از یکدیگر و جلوگیری از تعمیم های ناروا و در نتیجه، شناخت دقیق حقایق و واقعیت هاست.^{[۲۶] [۲۷]}

( اینجا فقط تکه ای از متن پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

۲‚۸‚۱. مفهوم دعا
در مفهوم شناسی، دعا را از منظر لغوی و اصطلاحی مورد بررسی قرار می دهیم.
کلمه «دعو» و مشتقات این واژه در قرآن کریم زیاد به کار رفته است . لذا ضرورت دارد ابتدا به معنا شناسی واژه «دعو» پرداخته و سپس وجوه معانی آن را در قرآن کریم و نهج البلاغه مورد بررسی قرار دهیم از طرفی نیز واژه های مرتبط دیگر مانند سؤال، طلب، ندا، استغاثه و …مورد دقت بیشتری قرار گیرد تا ارتباط معنایی این واژه ها با کلمه «دعو» روشن گردد .
در ابتدا کلمه «دعو» را از نظر لغوی و اصطلاحی مورد بحث قرار داده و سپس به وجوه معانی آن می پردازیم .
۱‚۲‚۸‚۱دعا در لغت
اصحاب لغت برای این واژه معانی نزدیک به یکدیگر ذکر کرده اند از جمله خواندن، با صدا متوجه کردن و . . . . ابن فارس در معنای دعو چنین می نویسد:
« دعو: اصلٌ واحدٌ و هوأن تمیل الشیء الیک بصوتٍ وکلامٍ یکون منک »^[۲۸] دعا یک معنای اصلی دارد وآن عبارت است از این که توجه چیزی را با صدا و سخن خود، به خودت جلب کنی .
در « التحقیق فی کلمات القرآن » چنین آمده است :
« دعو: هو طلب شیءٍ لأن یتوجه إلیه أو یرغب إلیه أو یسیر إلیه .»^[۲۹] ماده دعو دلالت دارد بر این که کسی چیزی را طلب کند به این منظور که توجه آن را به خود جلب کند یا به خودش متمایل نماید و یا حرکتش را به سمت خود سوق دهد . همچنین صاحب کتاب اضافه می کند که «دعا» به مطلق درخواست، میل و توجه از طرف مقابل گفته می شود ولی «دعوه» به اعتبار صیغه اش بر دعای مخصوص دلالت دارد .
ابن منظور می نویسد :
«دعا ا لرجل ناداه ^[۳۰]، دعا کردن شخص خواندن اوست ».
در « القاموس المحیط» آمده است که:
« الدعاء، الرغبه إلی الله تعالی»^[۳۱] ؛ دعا میل و رغبت به سوی خداوند متعال است .
گفته شده که در معنای مجازی «نازل کردن» نیز آمده است چرا که گفته می شود:« دعاه الله بمایکره »^[۳۲] خداوند برآنچه کراهت داشت نازل فرمود . خلیل بن احمد نیز چنین معنایی را برای دعا قائل شده است .^[۳۳]
راغب اصفهانی در معنای دعا می گوید:
« دعوته اذا سالته واذا استغثه . و الدعا الی الشئ الحث علی قصده . . .» یعنی اینکه می گویی: « دعوته » هنگامی است که از او چیزی بخواهی و زمانی که از او یاری بخواهی . . . خواندن به سوی چیزی، به معنای کسی را به کاری و چیزی دعوت و ترغیب کردن است .^[۳۴]
۲‚۲‚۸‚۱. دعا در اصطلاح
ابن فهد حلی در مقدمه کتاب عده الداعی دعا را این گونه تعریف می کند:
« الدعاء ..اصطلاحاً طلب الادنی للفعل من الاعلی علی جهه الخضوع و الاستعانه »^[۳۵]: دعا در اصطلاح عبارت است از این که موجود پایین تر از سر خضوع و یاری جستن انجام کاری را از وجودی برتر و والاتر طلب نماید .
علامه طباطبایی در المیزان می فرماید :
« الدعاء و الدعوه توجیه نظر المدعو إلى الداعی و یتأتى غالبا بلفظ أو إشار » ^[۳۶] دعا متوجه ساختن یا جلب نظر مدعو به داعی است که غالباً با لفظ یا اشاره ، صورت می پذیرد .
به نظر می رسد که این تعاریف تفاوت ماهوی ندارند بلکه هر کس یک مصداق خاصی را در نظر گرفته و با ملاحظه آن تعریف کرده است . حال هر کدام از این تعاریف را که انتخاب کنیم فرق چندانی نخواهد کرد آنچه مسلم است این است که دعا یک نوع عبادت و بلکه بهترین عبادت به حساب می آید، عبادتی که مظهر و نماینده تمام عبادات است .
پس می توان گفت که دعا ارتباط ویژه ای بین بنده نیازمند با معبود بی نیاز است که در آن بنده ی نیایشگر، خدای خویش را می خواند و خواسته هایش را با او در میان می گذارد و توجه او را به خود جلب می کند.
۳‚۲‚۸‚۱. وجوه معانی دعا در قرآن
دعا و مشتقات آن ۲۱۲ مرتبه ^[۳۷] به معانی مختلف مانند خواستن و طلب کردن در قرآن کریم بکار برده شده است .
در کتاب نیایش نامه^[۳۸] در مورد معانی مختلف دعا چنین آورده شده است :
دعا به معنی خواندن :
وَ إِنْ تَدْعُوهُمْ إِلَى الْهُدى‏ لا یَسْمَعُوا . . . ^[۳۹] خطاب به رسول الله( صلی الله علیه وآله) است، یعنی اگر آنها را به [راه‏] هدایت فرا خوانید، نمى‏شنوند .

۴-۴-۴- وجود یا افزایش تفاوت معنادار در توسعه‌یافتگی مناطق قومی، مذهبی و نژادی
درک تفاوت توسعه‌یافتگی در مناطق مختلف که آن مناطق به هویت‌ها و گروه های اجتماعی متفاوت تعلق دارند با مبانی و جوهره انسجام و تجانس اجتماعی تعارض دارد و قدرت اجتماعی را کاهش می‌دهد.^[۹۱]
برعکس، حرکت معنادار در جهت کاهش و رفع تفاوت‌ها نشانه افزایش اعتبار، مشروعیت و قدرت انسجام اجتماعی است.
به همین دلیل یکی از منابع تولید بحران هویت، وجود شکاف‌هایی از قبیل حاشیه- مرکز می‌باشد.^[۹۲]
در مورد ظهور تفاوت‌های فوق، عمدی یا غیرعمدی بودن ایجاد یا افزایش آنها تأثیر چندانی ندارد و تهدیدات مورد نظر از این علامت و نشانه، قابل دریافت و درک می‌باشد.
۴-۴-۵- عدم انطباق مرزهای جغرافیایی و مرزهای هویتی
در برخی از کشورها، هویت‌ها با مرزهای جغرافیایی منطبق نیستند. به عبارت دیگر مرز جغرافیایی که یکی از شاخص‌های هویت ملی و دولت- ملت می‌باشد نمی‌تواند تمام هویت‌ ملت را در خود جای دهد و هویت اعضای جامعه داخل مرز با اعضای خارج از مرز یکسان است (مانند وضع اکراد، آذری‌ها، بلوچ‌ها و عرب‌هادر ایران و کشورهای همجوار یا مانند فلسطینیان).^[۹۳]
چنین وضعی خودبه‌خود می‌تواند منبع چالش‌های گوناگون اجتماعی- سیاسی باشد.
بنابراین شرایط فوق را باید نشانه‌ای عمومی و کلی از تهدیدات اجتماعی- فرهنگی بدانیم اگرچه همین وضعیت، فرصت‌هایی را در اختیار کشور تهدید شونده قرار می‌دهد.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۴-۵- اختلافات درون صورت‌بندی اجتماعی
۴-۵-۱- میزان اختلافات بین طبقات با یکدیگر و شورش‌ها و تعارضات بین طبقهای
۴-۵-۲- میزان کشمکش میان شئون مختلف (روشنفکران و روحانیون و بین گروه‌های قوم/ ملی)
۴-۵-۳- اختلاف بین احزاب (رقابت محور یا حذف محور)
۴-۶- میزان رضایت مردم از زندگی و نگرش نسبت به آینده
میزان رضایت از وضعیت کلان کشور با بهبود آینده اقتصادی، بهبود آینده سیاسی، بهبود آینده اجتماعی، بهبود آینده اخلاقی و بهبود آینده مذهبی همبستگی دارد. مسئله مهم همبستگی بسیار زیاد با بهبود آینده سیاسی با این نوع رضایت دارد. به عبارت دیگر بهبود آینده اوضاع سیاسی در افزایش رضایت از محیط اجتماعی و کلان کشور بیش از هر متغیر دیگر مؤثر است.
۴-۷- میزان محرومیت درونی جامعه
نظریه محرومیت نسبی تد رابرت گر در اصل تلاشی برای تبیین خشونت داخلی است و می کوشد با بهره گرفتن از یافته های نظریه محرومیت نسبی و پیوند آن با خشونت داخلی، چارچوبی را برای یک نظریه عام درباره شرایطی که احتمال و شدت خشونت را تبیین می کند، ارائه نماید. به نظر او به رغم اهمیت ابعاد ساختاری دخیل در وقوع جنبشهای اجتماعی، آنچه اهمیت بیشتری دارد « نیل به شناختی نظام یافته از آن دسته از خصوصیاتی انسانی است که تعیین می کنند انسانها چگونه نسبت به برخی از ویژگیهای ساختاری جوامع خود واکنش نشان می دهند.
رئوس کلی نظریه وی این است که توالی علّی عمده در خشونت سیاسی ابتدا با بروز نارضایتی آغاز می شود، در مرحله ی دوم این نارضایتی سیاسی می شود و نهایتاً به تحقق عمل خشونت آمیز علیه موضوعات یا بازیگران سیاسی می انجامد. نارضایتی ناشی از ادراک محرومیت نسبی، شرط اساسی انگیزاننده مشارکت کنندگان در خشونت جمعی است. دو مفهوم مرتبط یعنی نارضایتی و محرومیت نسبی اکثر وضعیت های روانی مانند ناکامی، از خود بیگانگی، تعارضات میان وسیله و هدف، نیازهای ضروری و فشارها را که به طور صریح یا ضمنی در برداشت های نظری به عنوان عمل خشونت شناخته شده اند در بر می گیرند.
گر بر آن است که محرومیت نسبی به سرخوردگی و سرخوردگی به خشم میانجامد که خود می تواند به رفتار خشونت آمیز منتهی گردد. او بر خلاف نظریه پردازان قبلی، مستقیماً از حالت روحی به کنش خشونت آمیز جمعی نمی رسد، او به متغیرهایی اشاره می کند که شدت خشم و شدت احتمال بروز خشونت را تعیین می کنند. وی در نهایت شدت خشونت جمعی را تابعی از میزان محرومیت نسبی افراد می داند.
بنابراین فرض اصلی و مقدماتی گر این است که پیش شرط کشمکشهای داخلی خشونت آمیز، محرومیت نسبی است. منظور از محرومیت نسبی « تصور ذهنی اختلاف میان انتظارات ارزشی کنشگران و توانایی های ارزشی ظاهری در محیط آنهاست.» انتظارات توانایی های ارزشی، شرایطی هستند که شانس متصور کسب یا حفظ ارزشهایی را که اشخاص به شکلی مشروع انتظار کسب آنها را دارند تعیین می کنند. یعنی آنچه در واقعیت انتظار می رود که بدست آید.
به نظر گر میان مفهوم محرومیت نسبی و سرخوردگی می توان رابطه ای برقرار نمود. وضعیت موجد سرخوردگی یا ناکامی، شرایطی است که فرد بر اساس استانداردهای عینی در تلاش برای کسب یک ارزش عام یا تداوم در بهره مندی از آن با مانع اجتماعی یا فیزیکی روبرو می شود اما سرخوردگی زمانی ایجاد می شود که کنشگر از آن آگاه باشد. بنابراین اگر محرومیت نسبی عبارت است از تصور وجود شرایطی که باعث سرخوردگی می شود، واکنش عاطفی در مقابل آن خشم است. خشم می تواند طیفی وسیع از نارضایتی ملایم تا عصبانیت کور را در بر بگیرد. فرض بر آن است که میان شدت خشم و شدت محرومیت نسبی، رابطه ای مستقیم وجود دارد و نیز میان خشم و شدت یا میزان پرخاشگری نیز رابطه ای مستقیم وجود دارد. زیرا خشم شدید هنگامی ارضا می شود که منشأ سرخوردگی به شدت لطمه بخورد، هر چه شدت خشم بیشتر باشد طبعاً بخش وسیعتری از جمعیت به پرخاشجویی گرایش پیدا می کنند. گر به سه نوع محرومیت اشاره می کند:
۱- محرومیت ناشی از افول (محرومیت نزولی): ثابت ماندن انتظارات ارزشی و فرض زوال توانایی های ارزشی
۲- محرومیت ناشی از رشد خواسته ها: ایستایی نسبی توانایی ها و افزایش شدید انتظارات
۳- محرومیت پیش رونده: افزایش اساسی و همزمان در انتظارات و کاهش در توانایی ها
این سه نوع محرومیت می توانند عوامل علّی یا زمینه ساز خشونت باشند. اما مجموعه ای از قضایای دیگر شرایطی را که این رابطه در آن برقرار می شود، مشخص می سازند. شدت خشم تابع متغیرهای روانی- فرهنگی است. انتظارات ارزشی به طرق متفاوتی بر شدت خشم تأثیر می گذارند. هرچه شدت تعهد به یک هدف یا وضعیتی که محرومیت در ارتباط با آن بیشتر باشد، شدت خشم بیشتر خواهد بود. به علاوه هرچه قبلاً برای نیل به ان هدف یا حفظ وضعیت مطلوب تلاش بیشتری صورت گرفته باشد، خشم شدیدتر خواهد بود.
به نظر گر چهار دسته عوامل باعث تسهیل خشونت می شوند:
برانگیختن آگاهی متقابل در میان محرومان
ارائه توضیحی برای محرومیت
تعیین آماج قابل دسترسی و اشکال مناسب خشونت
تعیین اهداف بلند مدتی که دست یافتن به آنها با توسل به خشونت دنبال می شود.
نتیجه گیری گر این است که مردم طغیان می کنند چون ناراضی اند و ناراضی اند چون احساس می کنند به حقشان نرسیده اند.
نتیجه
در این فصل تلاش گردید تا به شاخص های تهدید امنیت ملی از منظر درون جامعه ای پرداخته شود و نقش ناکارآمدی دولت را در افزایش این تهدید ها مورد بررسی قرار دهد. در راستای تایید فرضیه تحقیق از نظر نگارنده مهمترین جلوه ناکارآمدی دولت در این بعد، کاهش گرایی هویتی و به تبع آن ناکارآمدی در بازسامان دهی فرهنگی(مهندسی فرهنگی) جامعه است که سبب گسترش نارضایتی اجتماعی شده است که خود در تعیین نوع رابطه جامعه- دولت موثر است. مولفه های این ناکارآمدی دولت و تاثیر آن در افزایش تهدید امنیت ملی در نمودار زیر ترسیم شده است:
فصل چهارم:
شاخص های تهدید جامعه- دولت امنیت ملی
پیشگفتار:
بر اساس مدل نظری این پژوهش دولت در عین تاثیرپذیری از جامعه دارای جایگاهی نسبتاً مستقل و نه کاملاً مستقل از جامعه است و به همین دلیل جامعه دارای توان تاثیر گذاری بر تعیین نوع حکومت، پذیرش یا رد حکومت و … از طریق سازوکارهای دموکراتیک و غیر دموکراتیک است.
به تعبیر علمی جامعه دروندادهای یک نظام سیاسی را از طریق ارائه داده ها و پشتیبانی ها ارائه می کند. اگر جامعه نتواند خواسته های خود را از نظام سیاسی محقق شده ببیند، از طریق فرایند بازخورد^[۹۴] به تغییر پشتیبانی ها و داده های خود اقدام خواهد کرد.
فرایند تغییر خواسته های جامعه از دولت از طریق سازوکارهای تاثیرگذاری جامعه-دولت زمانی بعد امنیتی پیدا می کند که سازوکارهای دموکراتیک تاثیرگذاری چون مشارکت سیاسی و… کاهش یابد و ساروکارهای غیر دموکراتیک تاثیرگذاری افزایش یابد. سازوکارهایی چون کاهش مشارکت، شورش، انقلاب و تجزیه طلبی. به این ترتیب نقش دولت در کنترل تغییر گرایش جامعه از ابزارهای دموکراتیک به ابزارهای غیر دموکراتیک از طریق بازتعریف و اصلاح اقدامات خود بسیار برجسته است. دولت قوی که فاقد تهدیدات امنیتی است، دولتی است که از طریق ابزارهای خود از افت جذابیت و مطلوبیت سازوکارهای دموکراتیک در بین جامعه جلوگیری می نماید. در این فصل به مهمترین شاخص های تهدیدات امنیت ملی از منظر روند تاثیرگذاری جامعه – دولت پرداخته خواهد شد. روند استدلالی این فصل نیز مانند فصول پیشین در صدد تایید فرضیه است که ناکارآمدی دولت در عملکرد خود سبب کاهش جذابیت ابزارهای دموکراتیک و روی آوردن بخشی از جامعه به ابزارهای غیردموکراتیک شده است که مهمترین آنها را می توان در حوادث تروریستی شرق و غرب کشور و نیز بهره گیری بخشی از مردم کشور از ابزراهایی مثل تجمعات خیابانی بجای سازوکارهای قانونی برای مطالبات سیاسی خود به دلیل عدم اقناع سیاسی مردم توسط نهادهای دولتی دید. این شاخص ها عبارتند از:
۳-۱-کاهش یا فقدان مشروعیت
مشروعیت به معنای توجیه‌پذیری اطاعت از قدرت حاکم و قانون،^[۹۵] یکی از لوازم ضروری حاکمیت است که می‌توان از طریق آن سطح و وضع حاکیت را بررسی کرد. به بعبارت دیگر شدت و ضعف مشروعیت با شدت و ضعف حاکمیت رابطه مستقیم دارد.
البته مسأله مشروعیت معنای وسیعی دارد و از مبانی مشروعیت تا کارآمدی امتداد می‌یابد بنابراین کاهش مشروعیت گاه ناشی از کاهش توان توجیهی مبنای مشروعیت یک سیستم است و گاه به دلیل ناکارآمدی آن سیستم است.^[۹۶]
۳-۱-۱- اعلام یا توسعه مبانی متفاوت و معارض با مبنای مشروعیت موجود
هر نظام سیاسی برای توجیه مشروعیت خود به مبانی خاصی استناد می‌کند. به طور مثال ممکن است یک نظام، مشروعیت خود ناشی از حکم خداوند یا رأی مردم یاترکب آنها یا قدرت پادشاه و … بداند.
در صورتی که مبانی مشروعیت‌ساز دیگر در کنار مبانی موجود مطرح شود و این مبانی توان رقابت و توسعه نیز داشته باشند باید منتظر چالش مشروعیت در نظام موجود بود.^[۹۷]
۳-۱-۲- توجیه‌ناپذیری رفتار حکومت
حکومت‌ها نه تنهاباید کار خوب ومفید برای جامعه خود انجام دهند بلکه باید توان توجیه منطقی رفتار و تصمیمات خود برای اکثریت جامعه را داشته باشند در غیر اینصورت به مشروعیت خود صدمه وارد می‌کنند.
بنابراین به هر دلیل درونی یا بیرونی، رفتارهای حکومت،‌توجیه‌پذیری خودرا از دست بدهد شرایط تهدید مشروعیت قابل بررسی می‌باشد.
۳-۱-۳- عدم تحقق اهداف اعلام شده
برنامه ریزی، تخصیص بهینه منابع و دسترسی به اهداف،‌جزئی از فلسفه وجودی حکومت ها می‌باشد. بنابراین اگر حکومت و دولتی نتواند به اهداف خود دست یابد فلسفه وجودی و به تبع آن مشروعیت خود را از دست می‌دهد.^[۹۸]
این نشانه به ویژه در رژیم‌های دموکراتیک که نظارت و نگرش‌ها مردم در بقای آن تأثیر صلی را دارد مهم‌تر است.
۳-۱-۴- عدم تغییر یا کاهش شاخص‌های بهبود زندگی
این نشانه نیز در ادامه نشانه قبل می‌تواند به کاهش یا عدم مشروعیت یک نظام سیاسی منجر گردد. ناکامی در برآورده ساختن نیازهای مردم،‌ به ویژه نیازهای اولیه آنها، مشروعیت را مخدوش می‌کند.^[۹۹] بنابراین درک چنین نشانه‌ای علامت خطر برای حوزه مشروعیت حاکمیت خواهد بود.
۳-۲- کاهش یا فقدان مشارکت
مقصود از مشارکت، پذیرش دخالت داوطلبانه اشخاص یا گروه های سیاسی، اقتصادی و … در حاکمیت و قدرت از سوی حاکمیت می‌باشد. بنابراین میزان مشارکت با میزان چنین پذیرش و دخالتی شناسایی می‌شود.^[۱۰۰]
در نظام‌های مردم سالار مشارکت به طور طبیعی با مشروعیت ارتباط دارد. البته مشارکت بایدبه ظرفیت پاسخگویی تناسب داشته باشد و الا مشارکت بالا بدون وجودظرفیت‌های جذب وپاسخگویی به بحران سیاسی منجر خواهد شد.

۱-روش آگلوتیناسیون سریع با آنتی ژن ویژه این روش
۲-آزمون آگلوتیناسیون رایت در لوله
۱-۹- درمان بیماری:
درمان بیماران بر اساس رژیم های توصیه شده توسط کمیته فنی کشوری، به شرح زیر می باشد :
۱- بزرگسالان: کپسول ۳۰۰ میلی گرمی ریفامپیسین بهمراه داکسی سیلیکین ( ۱۰۰ میلی گرم) برای مدت حداقل ۸ هفته . تتراسیکلین ۵۰۰ میلی گرم ( هر ۶ ساعت خوراکی ) به همراه استرپتومایسین ( ۱ گرم عضلانی ) یا جنتامایسین ( ۵-۳ میلی یا کیلو گرم عضلانی ) برای مدت ۲ یا ۳ هفته.کپسول ۳۰۰ میلی گرمی ریفامپیسین بهمراه کوتریموکسازول بالغین ( ۲ قرص ) خوراکی به مدت حداقل ۸ هفته.

(( اینجا فقط تکه ای از متن درج شده است. برای خرید متن کامل فایل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. ))

۲- اطفال: قطره ریفامپسین به اضافه کوتریموکسازول به مدت حداقل ۸ هفته . ضمناً ترکیب کوتریموکساول به همرا جنتامایسین نیز توصیه می شود.
۳- زنان باردار: درمان زنان باردار شبیه درمان بزرگسالان با ترکیب کوتریموکسازول به اضافه ریفامپسین ، است فقط در ماه اول . ماه آخر حاملگی ریفامپسین به تنهایی تجویز می شود.(بروسلوزیس،۲۰۰۶)
توصیه لازم در درمان تب مالت :
۱- درمان تک دارویی در مورد تب مالت توصیه نمی شود. مگر در ماه اول و ماه آخر حاملگی.
۲- حداقل دوره درمان ۸ هفته و حداکثر آن بستگی به نظر پزشک معالج دارد .
۳- با توجه به اهمیت برنامه کنترل رشد جمعیت ، درمان مواد مبتلا به تب مالت با رژیم درمانی دارای ریفامپسین سبب بی اثر شدن قرص های کنتراسپتیو می شود.که به بیماران واجد شرایط باید آگاهی لازم داده شود .( بروسلوزیس،۲۰۰۶)
۴- برای کنترل نتیجه درمان بیمار،بررسی آزمایشگاهی به تنهایی توصیه نمیشود(بروسلوزیس،۲۰۰۶)
۱-۱۰- پیشگیری (واکسیناسیون) و ریشه کنی:
هیچ درمانی برای بروسلوز شناخته نشده است و راه های کنترل بیماری عمدتاً بر پایه پیشگیری ازبیماری از طریق واکسیناسیون گوساله ها با واکسن سویه ۱۹ قرار دارد. ریشه کنی بیماری با کشتاردام های آلوده بعد از مشخص شدن آزمایش های سرم خون و شیر، و واکسیناسیون انجام می گیرد. از لحاظ اطمینان حیوانات مظنون را از بقیه جدا کرده و در محل مخصوصی با در نظر گرفتن شرایط وپیش بینی های لازم نگهداری می کنند. نکته مهمتر اینکه نباید دام جدیدی را به گله اضافه کرد مگراینکه از سلامتی آن اطمینان حاصل شده باشد. (آشفورد و همکاران،۲۰۰۴)
برای ایمن نمودن دام ها علیه این بیماری باید بره و بزغاله های نر و ماده جایگزین را قبل از شیرگیری واکسینه نمود. واکسن بروسلوز یک واکسن زنده بوده و لذا تزریق یکبار آن در حدود سه تا شش ماهگی(قبل از سن آمیزش) برای طول دوره اقتصادی دام کافی است. معمولا میزان تزریق معادل ۱ سی سی است که به صورت زیر جلدی در ناحیه پشت کتف و یا گردن تزریق می شود در مبارزه علیه بروسلوز، واکسیناسیون نقشی اساسی دارد. تاکنون واکسن های متعددی از سویه های زنده یا کشته ی بروسلا آبورتوس، بروسلاملی تنسیس و بروسلاسوئیس جهت ایمن سازی گاو، گوسفند و بز، خوک، شتر و دیگر حیوانات مورد استفاده قرارگرفته است، واکسیناسیون در انسان نیز به طور محدود انجام پذیرفته است.(اسکندروس و همکاران،۲۰۱۱)
مهمترین واکسن های مورد مصرف دامپزشکی را واکسن زنده ی سویه ی ۱۹ بروسلا آبورتوس، واکسن زنده و کشته ی سویه ی ۲۰/۴۵ بروسلا آبورتوس، واکسن زنده ی سویه ی موکوئیدی M ۱۰۴ بروسلا آبورتوس، واکسن کشته ی سویه یH ۳۸ بروسلاملی تنسیس، واکسن زنده ی سویه ی Rev1 بروسلاملی تنسیس، واکسن زنده ی سویه یS۲ و غیره شامل می گشتند. شاخص های آنتی ژنیک در بروسلا زیاد هستند که از شاخص های عمده آن می توان لیپوپلی ساکارید(LPS) ، پروتئین های سیتوپلاسمی و پروتئینهای غشاء خارجی را نام برد. بروسلا به چند دلیل دارای بیماریزایی غیر معمول می باشد اولا فاقد فاکتورهای بیماریزایی کلاسیک نظیر اگزوتوکسین یا اندوتوکسین می باشد و بیماریزایی LPS آن بطور تیپیک شبیه LPS بقیه باکتری های گرم منفی نیست ، ثانیا بروسلا دارای تمایل به تهاجم و ماندگاری در میزبان انسانی از طریق مهار مرگ سلولی است. بیان عوامل ژنی خاص در باکتری بروسلا باعث می شود که بتواند شرایط سخت داخل سلولی را تحمل کند. از جمله این عوامل می توان به پروتئینهای شوک حرارتی اشاره کرد. بعد از اینکه باکتری در سلول همانند سازی کرد ، با کمک همولیزین ها آزاد شده و باعث نکروز سلولی می گردد سپس باکتری های تکثیر کرده می توانند وارد سلولهای دیگر شده و از این طریق می توانند به سرعت در سلولها و بافتهای مختلف گسترش یابند و باعث آسیب رساندن به بافتهای مختلف گردند.(بروسلوزیس ۱۹۹۷) اولین واکسن بروسلا برپایه سویه ۱۹ بروسلا آبورتوس است. این واکسن حفاظت مناسبی در مقابل بروسلا آبورتوس در گاو ایجاد می کند سویه واکسن بروسلا آبورتوس RB51 یک نمونه موتانت خشن^[۲۴] و مقاوم به ریفامپین است که جایگزین سویه S19 برای واکسیناسیون گاو گردید. در حال حاضر سویه زنده تخفیف حدت یافته بروسلا ملیتنسیسRev1 بطور گسترده بعنوان واکسن در مقابل بروسلا ملیتنسیس در گوسفند و بز استفاده می گردد.تاکنون هیچ واکسن انسانی بروسلا بخصوص در اتحادیه اروپا و آمریکا مجوز نگرفته است چون تمام واکسنهای حیوانی حتی سویه بروسلا آبورتوس RB51 و سویه بروسلا ملیتنسیسRev1 برای انسان بیماریزا هستند)جین کونگ و همکاران،۲۰۰۳).
استفاده از یک مشتق از سویه S19 بروسلا آبورتوس بصورت زیر جلدی یا تیغ زدن بر روی حداقل ۳ میلیون نفر در جمهوریهای آسیایی شوروی سابق باعث شد که ۱۱-۵ برابر میزان بروسلوز انسانی فصلی را در آن مناطق در دهه ۱۹۵۰ کاهش دهد. این واکسن ایمنی کوتاه مدت داده و نیاز به دوز تقویت کننده^[۲۵] دارد. سویه بروسلا آبورتوس ۱۰۴M در چین استفاده شده است ولی اطالاعات زیادی از آن موجود نمی باشد. فراکشن پپتیدوگلیکان محلول در فنل از بروسلا ملیتنسیس سویه M15 در فرانسه استفاده شده است ولی میزان ایمنی زایی مناسبی نداشته است(جین کونگ و همکاران،۲۰۰۳ ؛ هوور و همکاران،۱۹۹۹).
کاملا مشخص شده که پروتئینهای غشاء خارجی (Omps) گونه بروسلا از خاصیت ایمونوژنیک و حفاظت زایی بالقوه ای برخوردار هستند. ایمنی زایی غیر فعال در موش نشان داده که مخلوطی از آنتی بادی های منوکلونال ضد چند پروتئین غشاء خارجی بروسلا حفاظت ضعیفی در مقابل سویه های صاف بروسلا ایجاد کرده و یا اصلا هیچ حفاظتی ایجاد نکردند در حالیکه در مقابل سویه خشن بروسلااویس حفاظت ایجاد کردند. حفاظت زمانی بهتر بود که آنتی بادی منوکلونال ضد Omp31 در مخلوط موجود بود. واکسیناسیون با مخلوط دارای Omp31 باعث القای واکنش آنتی بادی قوی شده ولی پاسخ سلولی ضعیفی ایجاد کرد و حیوانات واکسینه شده را در مقابل چالنج با بروسلا اویس محافظت کرد ولی در مقابل چالنج با بروسلا ملیتنسیس محافظتی ایجاد نکرد(کاساتارو و همکاران،۲۰۰۵).واکسن DNA کد کننده پروتئین Omp31 بروسلا ملیتنسیس: ایمنی زایی موش با این واکسن باعث ایجاد حفاظت ناقص در مقابل بروسلا اویس و بروسلا ملیتنسیس گردید. موشهای ایمن شده با این واکسن پاسخ همورال خیلی ضعیفی را نشان دادند و فاقد پاسخ Th1 بودند ولی سلولهای TCD8 را تحریک کرد. حفاظت ایجاد شده در ارتباط با القاء سلولهای TCD8 اختصاصی Omp31 بوده که سلولهای آلوده به بروسلا را از طریق مسیر پرفورین^[۲۶] حذف می کند این واکسن پاسخ سایتوتوکسیتی را القاء کرده و در نتیجه باعث حفاظت در مقابل بروسلا گردید(کاساتارو و همکاران-۲۰۰۵). استفاده از واکسن DNA پلاسمیدی حامل ژن Omp31 در مرحله اول و سپس بعنوان تقویت کننده^[۲۷] استفاده از پروتئین نوترکیب Omp31 همراه با ادجوانت ناقص فروند در موش و سپس چالنج با بروسلا بویس و بروسلا ملیتنسیس باعث پاسخ ایمنی و محافظت گردید. تیتر IgG1 و IgG2 در سرم نسبت به استفاده به تنهایی واکسن پلاسمیدی و پروتئین نوترکیب بیشتر بود. اسپلنوسیتهای این حیوانات سطح بالایی از اینترفرون گاما نسبت به استفاده به تنهایی واکسن پلاسمیدی و پروتئین نوترکیب تولید کردند در مقابل ، سطح اینترلوکین ۲ تولید شده با دو سری دیگر قابل مقایسه بودند. هیچ کدام از انواع ایمن شده دارای اینترلوکین ۴ نبودند. قابل توجه اینکه پروتئین نوترکیب Omp31 که به عنوان تقویت کننده تزریق گردید ، تولید IL10 را تحریک کرد در حالیکه در دو سری دیگر (پروتئین نوترکیب و واکسن پلاسمیدی به تنهایی) IL10 تولید نگردید. بطور کلی استفاده ازواکسن پلاسمیدی در ابتدا و سپس پروتئین نوترکیب بصورت بوستر باعث گسترش مناسب حفاظت در مقابل چالنج با بروسلا بوویس و بروسلا ملیتنسیس گردید. (کاساتارو و همکاران،۲۰۰۷)
استفاده از پروتئین پریپلاسمیک bp26 و ژن پروتئین چاپرون فاکتور تریگر(TF) این دو ژن از روی ژنوم بروسلا ملیتنسیس ۱۶M جدا شده و در پلاسمید pcDNA3.1 بطور جداگانه کلون شده و پلاسمیدها بصورت درون عضله ای بطور جداگانه و ترکیبی به موش تزریق شدند. سطح حفاظت مناسبی در موشهای ایمن شده بعد از چالنج با بروسلا ملیتنسیس مشاهده گردید که سطح حفاظت در موشهایی که بطور ترکیبی با هر دو پلاسمید نوترکیب ایمن شده بودند بیشتر بود. هر دو پلاسمید باعث القاء تولید IgG و اینترفرون گاما شدند ولی bp26 به تنهایی باعث القاء IL4 ، IL5 وIL6 شد.ویزکاینو و همکاران(۱۹۹۶) نتایج نشان می دهد که این دو پروتئین کاندیدهای عالی جهت استفاده به عنوان واکسن در مقابل بروسلوز می باشند یانگ و همکاران،(۲۰۰۵). استفاده از ژنهای sodC ، لومازین سنتتاز و P39 (باکتریوفرین) ژن P39 از بروسلاهای بیماریزای مختلف جدا و بر روی پلاسمید کلون گردید. ژن سوپر اکسید دسموتاز(sodC) و لومازین سنتتاز از بروسلا آبورتوس جدا گردید. ایمنی زایی با بهره گرفتن از پلاسمیدهای حامل این ژنها در موش باعث ایجاد حفاظت ناقص بعد از چالنج گردید(یانگ و همکاران،۲۰۰۵؛ویزکاینو و همکاران،۱۹۹۶).
۱-۱۰-۱تولید پروتئین نوترکیب Omp31
تولید پروتئین نوترکیبOmp31 با وزن kDa 31 از بروسلا ملیتنسیس و فرمولاسیون آن با ادجوانت ناقص فروند و تزریق بصورت زیرجلدی در موش باعث پاسخ ایمنی سلولهای TCD4(Th1) شده ودر مقابل بروسلا بویس و بروسلا ملیتنسیس ایمنی ایجاد کرد. این واکسن باعث القاء پاسخ IgG با تیتر بالای IgG1 و IgG2 گردید. همچنین در سلولهای طحال موشهای ایمن شده با این واکسن IL2 و اینترفرون گاما تولید گردید اما IL10 و IL4 تولید نشد(یانگ و همکاران،۲۰۰۵؛راجان،۲۰۰۲).
۱-۱۰-۲ استفاده از NPAP
ارتباط نزدیک ژنتیکی و آنتی ژنیک بین بروسلا و آلفاپروتئوباکتریا های غیر بیماریزا^[۲۸](NPAP) در چندین مقاله مورد بررسی گردیده است. موشهایی که بصورت زیر جلدی با باکتری هایی با حرارت کشته شده اکروباکترمنتروپی^[۲۹]،مزوریزوبیوم۳،آگروباکتریوم تومفسینس۴و سینوریزوبیوم۵و بروسلا آبورتوس سویه H38بعنوان کنترل مثبت ایمن شده بودند مورد چالنج با بروسلا آبورتوس سویه ۲۳۰۸ قرار گرفتند. ۳۰ روز پس از چالنج میزان CFU طحالی بطور قابل ملاحظه ای در موشهای ایمن شده با این باکتری ها پایین بود. از NPAP بصورت زنده وخوراکی در موش استفاده گردید و با بروسلا آبورتوس بصورت خوراکی چالنج شدند. ایمنی زایی با NPAP باعث القاء قابل ملاحظه IgG گردید. در مورد تمام انواع NPAP بکار برده شده ، سطح ایمنی بالاتر از ایمنی زایی سیستماتیک بوده ولی نسبت به ایمنی زایی خوراکی با بروسلا آبورتوس با حرارت کشته شده پایین تر بود. این نتایج نشان می دهد که ایمنی زایی با NPAP بخصوص O. anthropi باعث ایجاد حفاظت ناقص (partial) در مقابل چالنج با بروسلا آبورتوس کرد(دلپینووهمکاران ،۲۰۰۷؛راجان،۲۰۰۲).
۱-۱۰-۳ استفاده از بروسلا ملیتنسیس سویه WR201
سویه WR201 ازایجاد شکست بر روی اپرون purEK و جایگزینی آن با ژن مقاومت به کانامایسین در بروسلا ملیتنسیس ۱۶M در سال ۱۹۹۵ ایجاد گردید. این سویه جهت رشد بر روی محیط حداقل نیاز به پورین دارد در نتیجه بر روی محیط کشت سلولی ماکروفاژ انسانی با دشواری تکثیر می یابد. بعد از تزریق داخل صفاقی موش ، این سویه در کبد ، شش و طحال کلنی ایجاد کرده و به مدت چهار هفته در طحال پایدار می ماند و بعد از هشت هفته از هر سه عضو پاک می گردد وهر دو پاسخ ایمنی سلولی و همورال القاء می شود. علاوه بر آن این واکسن موشها را در مقابل انتشار سیستماتیک باکتری بعد از چالنج بصورت تنفسی با سویه ۱۶M محافظت کرده و باعث پاک شدن باکتری از ریه ها می گردد. در داخل سرم آنتی بادی های ضد LPS و آنتی ژنهای دیگر مشاهده گردید. اسپلنوسیتهای حیوانات ایمن شده IL2 ، اینترفرون گاما و IL10 آزاد می کنند(هوور و همکاران ،۱۹۹۹).
۱-۱۰-۴ استفاده از پروتئینهای غشاء داخلی ۱۶ و ۱۹ (Omp16 & Omp19) بروسلا آبورتوس
این پروتئینها از باکتری بروسلا آبورتوس جدا شده و با و بدون ادجوانت ناقص فروند فرموله شده و بر روی موش تست شده است که در مقابل آلودگی با بروسلا آبورتوس محافظت مناسبی را نشان دادند. البته نمونه های بدون ادجوانت ناقص فروند باعث حفاظت بالاتری شدند. سطح حفاظت ایجاد شده توسط واکسنهای تست شده بدون ادجوانت مشابه ایمنی زایی بوسیله بروسلا آبورتوس S19 بوده و باعث القاء سلولهایT اختصاصی CD4 و CD8 و تولید اینترفرون گاما و القاء پاسخ ایمنی سلولهای Th1 شدند. استفاده از این پروتئینها همراه با ادجوانت هیدروکسید آلومینیوم یک حفاظت سیستمیک ایجاد کرد و همراه با توکسین کلرآ به عنوان واکسن باعث حفاظت خوراکی در مقابل بروسلا آبورتوس گردیدند. هر دو حالت ایمنی زایی ، حفاظت یکسانی را مقابل واکسنهای S19 و RB51 نشان دادند. بطور کلی این نتایج نشان می دهد که پروتئینهای Omp16 یا Omp19 بدون ادجوانت ناقص فروند می توانند کاندید مناسبی به عنوان یک واکسن زیر واحدی در مقابل بروسلوز انسانی یا حیوانی باشند(پاسکوویچ و همکاران،۲۰۰۹).
۱-۱۰-۵ تولید سویه زنده تخفیف حدت یافته با جهش بر روی ژنهای manBA ، virB2 و asp24در هر دو سویه بروسلا آبورتوس و بروسلا ملیتنسیس
جهش بر روی asp24 باعث تسلط بر آنتی ژن O و سیستم ترشحی نوع ۴ می گردد ، این می تواند یک کاندید ایده آل جهت بررسی اهمیت این دو عامل بیماریزای مهم در کارایی واکسن باشد. جهش بر روی ژن virB2 باعث عدم پایداری باکتری در ماکروفاژ می گردد. موتانتهای خشن manBA بعد از یک هفته از واکسیناسیون در موش تعدادشان به شدت کاهش پیدا کرد ولی پنج هفته زمان نیاز بود تا کاملا زدوده گردند. موتانتهای virB آهسته تر از موتانت manBA پاک شده که نشان دهنده این است که نقص آنها باعث زنده ماندن آنها در مراحل دیگر عفونت می گردد. موتانتهای asp24 خیلی آهسته تر یعنی بعد از ۱۶-۱۰ هفته از سلولهای موش پاک شدند که نشان دهنده این است که Asp24 ممکن است فقط برای پایداری میکروارگانیزم نیاز باشد. موتانتهای asp24 موش را در مقابل عفونت و چالنج در تمام زمانها بهتر از دو موتانت دیگرو حتی واکسنهای موجود حفظ کرده لذا این سویه بهترین کاندید برای واکسن تخفیف حدت یافته است(مک دوناگ و همکاران،۲۰۰۶).
۱-۱۰-۶ جهش بر روی ژنهای دخیل در سنتز LPS
همانطور که قبلا آمد یکی از مشکلهای واکسن Rev1 به دلیل ایجاد آنتی بادی علیه LPS آن ایجاد مشکل در تشخیص دام بیمار از دام واکسینه می باشد. اگر بر روی ژن یا ژنهای دخیل در سنتز LPS جهش ایجاد شود این مشکل رفع شده و ممکن است از بیماریزایی آن نیز برای انسان کاسته شود. در یک تحقیق در سال ۲۰۰۷ تعدادی باکتری موتانت بروسلا ملی تنسیس که بطور اتفاقی جهشهایی بر روی ژنهای دخیل در سنتز اولیگوساکارید مرکزی(core) و O-پلی ساکارید انجام شده بود جدا گردید. تمام سویه ها بر روی موش بصورت زیر جلدی بررسی شدند که فقط دو سویه موشها را در مقابل دوز ۱۰۰۰ برابری سویه Rev1 محافظت کردند. این دو سویه دارای جهش بر روی ژنهای دخیل در انتقال و تجمع O- پلی ساکارید بودند و بطور ضعیف تولید آنتی بادی های ضد LPS سویه های صاف را القاء میکردند. نتایج نشان داد که هیچ موتانت خشنی برابر با Rev1 در مدلهای آزمایشگاهی نبوده و سویه های واکسن خشن جهت کنترل بروسلوزیس در مناطق اندمیک مناسب هستند(گونزالز و همکاران ،۲۰۰۸) .
۱-۱۰-۷ استفاده از LPS خالص شده بروسلا ملیتنسیس
LPS خالص شده بروسلا ملیتنسیس به تنهایی یا با پروتئین غشاء خارجی نایسریا مننژیتیدیس گروه B به عنوان کمپلکس غیر کووالانت بصورت زیر جلدی و تنفسی بر روی موش تست گردید. دو دوز از واکسن به فاصله چهار هفته استفاده گردید. موشهای ایمن شده ، چهارهفته بعد از آخرین دوز واکسیناسیون با بروسلا ملیتنسیس ۱۶M بصورت تنفسی چالنج شدند. بعد از هشت هفته از چالنج ، محافظت مناسبی در برابر گسترش عفونت در کبد و طحال موشهای ایمن شده بصورت تنفسی مشاهده گردید. موشهایی که بصورت زیر جلدی ایمن شده بودند محافظت مناسبی در کبد ، طحال و ریه ها نشان دادند(باتاچارژی و همکاران،۲۰۰۶).
۱-۱۰-۸ استفاده از پروتئین CP24
ژن (cp24)ribosome recycling factor (RRF)-homologous protein بروسلا ملیتنسیس کلون و در E.coli بیان گردید. این پروتئین نوترکیب در موش چالنج شده با بروسلا ملیتنسیس باعث واکنش ازدیاد حساسیت تاخیری (DTH) گردید. ژن این پروتئین بر روی پلاسمید pcDNA کلون و به عنوان یک DNA واکسن به موش تزریق گردید. همچنین پروتئین نوترکیب نیز با ادجوانت به موش تزریق گردید. DNA واکسن باعث القاء تولید IgG2 گردید در حالیکه پروتئین نوترکیب باعث القاء تولید IgG1 گردید و هر دو روش باعث القاء تولید سلولهای تولید کننده اینترفرون گاما شدند. پروتئین نوترکیب باعث تولید IL10 گردید ولی DNA واکسن نتوانست. هیچکدام قادر به حفاظت موش در مقابل چالنج با بروسلا ملیتنسیس نشدند(کاساتارو و همکاران،۲۰۰۲).
۱-۱۰-۹ نتیجه گیری در مورد بهترین حالت ممکن واکسن انسانی بروسلا ملیتنسیس
بطور کلی مناسبترین واکسنی که علیه بروسلا می تواند مورد استفاده قرار گیرد یک واکسن زنده تضعیف شده بدون OPS می باشد زیرا ۱- یک سویه بروسلا زنده می تواند در میزبان پایدار بوده و پاسخ ایمنی Th1 را تحریک کرده و آنتی ژنهایی را که سلولهای B و T را تحریک کنند فراهم کند. ۲- فقدان OPS می تواند به عنوان یک مارکر شناسایی جهت تمایز حیوانات آلوده شده و واکسینه مورد استفاده قرار گیرد. بنابر این با جهش بر روی ژنهای دخیل در سنتز اولیگوساکارید مرکزی(core) و O-پلی ساکارید در سویه Rev1 میتوان یه چنین سویه ای دست یافت.(شریفات و همکاران،۲۰۰۸؛اسپیرا و همکاران،۲۰۰۶)
۱-۱۰-۱۰ مجوز استفاده از واکسن بروسلا ابورتوس سویه RB51 برای استفاده در گاوها
در فوریه ۱۹۹۶ مجوز سازمان بازرسی سلامتی حیوانات واکسن بروسلا ابورتوس سویه RB51 برای استفاده در احشام بعنوان بخشی از برنامه دولت فدرال برای ریشه کنی تب مالت صادر شد.بروسلا ابورتوس سویه RB51 ثبات ژنتیکی دارد.جهش مورفولوژی سخت که فاقد زنجیره های پلی ساکاریدی بر روی سطح باکتری است . این زنجیره جانبی باعث گسترش تشخیص پاسخ انتی بادی یک حیوان به الودگی بروسلا است.بنابراین واکسن سویه RB51 موجب تولید انتی بادی ها بر اساس تست های تشخیصی استاندارد نمی شود. واکسن ما حصل سایر شکلهای انتی بادی هاست که می تواند کشف شود با یک ازمایش ویژه اگر یک حیوان واکسینه شده است این باعث یک پاسخ سلولی می شود که وظیفه اش در درجه اول برای محافظتش در برابر بروسلوز است.سویه RB51 موثرتر از واکسن بروسلا ابورتوس سویه ۱۹ است اما بسیار کمتر در گاوها ابورتیژنیک است.این باعث هیچ گونه علایم بالینی پس از واکسیناسیون نمی شود, و باعث واکنش موضعی در محل تزریق واکسن هم نمی شود.ارگانیسم از جریان خون ظرف سه روز پاک می شود و در ترشحات بینی و بزاق یا ادرار هم وجود ندارد.ضعف دستگاه ایمنی باعث عود کردن نیست و ارگانیسم از گاوهای واکسینه شده به گاوهای واکسینه نشده گسترش نمیابد. در همه ی گاوهایی که بیش از سه ماه عمر دارند واکسن بی خطر است.در صورتی که انسان در معرض آن قرار گیرد سویه RB51به طیف وسیعی از آنتی بیوتیکهای مورد استفاده در بروسلوزیس انسانی حساس است اما به ریفامپین و پنی سیلین مقاوم است.(کاروف و همکاران،۱۹۸۴؛اوگالد و همکاران،۲۰۰۰)
واکسن سویه RB51باید توسط دامپزشک معتبر تجویز شود یا توسط اداره ایالتی یا فدرال سلامتی حیوانات.گوساله ها باید با دوز گوساله بین سن چهار ماهگی تا یک سالگی واکسینه شوند.واکسیناسیون باید با وسایل فلزی مخصوص و بصورت زیر پوستی انجام شود.واکسیناسیون زیر پوستی همان واکسن سویه ۱۹ بروسلا آبورتوس است.در حال حاضر واکسن سویه ۱۹ بروسلا آبرتوس از بازار یا از برنامه ریشه کنی بروسلوز جمع آوری نشده است. اما سازمان بازرسی سلامتی حیوانات توصیه می کند که واکسن سویه ۱۹ متوقف شود.و برخی ایالتها دیگر اجازه واکسیناسیون با سویه ۱۹ را نمی دهند.واکسن بروسلا ابورتوس سویه RB51 هنوز برای استفاده عمومی در گاومیشها مورد تایید نیست. مطالعات اولیه نشان میدهد کهRB51 برای گوساله ها و گامیشها بی خطر و موثر است. اما به منظور مجوز مشروط برای RB51 در گاومیشها ازمایشهای ایمنی و اثر بخشی باید تکمیل شوند.( کاروف و همکاران،۱۹۸۴؛اوگالد و همکاران،۲۰۰۰)
گوساله های گاو میش می توانند توسط سویه RB51 واکسینه شوند به عنوان بخشی از آزمایشهای مزرعه بی خطر قبل از اینکه شروع به گرفتن مجوز کند.الزامات مورد نیاز برای شرکت در آزمایش این است که همه واکنشهای غیر طبیعی یا مشکلات بالینی مرتبط با واکسیناسیون به اداره کشاورزی ایالت متحده و سازمان بازرسی سلامتی حیوانات و گیاهان و سازمان دامپزشکی و تحقیقات دامپزشکی گزارش شود.(ویزکاینو و همکاران،۱۹۹۶)
واکسیناسیون گاومیشها به عنوان بخشی از آزمایشات مزرعه بی خطر به رسمیت شناخته خواهد شد.که موجب واکسیناسیون رسمی و نمودار واکسیناسیون و شناسایی مناسب خواهد شد تحت عنوان روشها و قوانین برنامه ریشه کنی بروسلوزیس.واکسن بروسلوز زنده بروسلا ملیتنسیس سویه Rev 1 خشک و منجمد برای مصارف دامپزشکی واکسن بروسلوز (زنده) بروسلا ملیتنسیس سویه Rev 1 خشک و منجمد برای مصارف دامپزشکی یک سوسپانسیون منجمد و خشک از سویه Rev 1 بروسلا ملیتنسیس زنده است. واکسن شامل حداقل و حداکثر باکتری زنده در هر دوز است.بروسلا ملیتنسیس سویه ۱Rev در یک محیط مناسب متوسط بدست میآید.روش بدست آوردن به اینگونه است که برای حفظ ویژگی باکتری ها باید از تجزیه آنها جلوگیری کرد. باکتریها در یک محلول بافر معلق میشوند که ممکن شامل معتدل کننده مناسب باشد .محلول سوسپانسیون در ظروف تقسیم شده قرار میگیرد.(راجان،۲۰۰۲)
انتخاب سویه واکسن: فقط یک سویه واکسن نشان داده است که میتواند از نظر ایمنی در ساخت واکسن رضایت بخش باشد.(آشفورد و همکاران،۲۰۰۴)
ایمنی: ۴۰ گوسفند ماده با سن ۴ یا ۵ ماه از یک گله که واکسینه نشده است بدون ابتلا به بروسلوز استفاده شده است.برای بدست آوردن سویه بهتر بروسلا ملیتنسیس به مدت ۲۴ ساعت در محیط آزمایشگاه کشت داده شد.سویه H38 مورد استفاده قرار گرفت.در تست مقدماتی از حیواناتی با نژاد و سن یکسان استفاده شد.با توجه به تست اصلی انجام شده برای مشخص کردن دوز که بین و واحد تشکیل دهنده کلونی است و بعنوان عامل سقط جنین در همه حیوانات غیر واکسینه شناخته میشود.(۳۵). نیمی از حیوانات واکسینه شده که عمرشان بین ۴ تا ۶ ماه است با توجه به برنامه های توصیه شده و استفاده از حداقل دوز توصیه شده.دوره آمادگی برای تولید مثل در ۴۰ حیوان با هم هماهنگ شده وقتی در سنین ۱۰ تا ۱۲ ماهگی باردار شده اند.تست بارداری در کلیه حیوانات ۲ تا ۳ ماه پس از تلقیح انجام شد و همه حیواناتی که آبستن نبودند از آزمایش حذف شدند.همه حیوانات باردار با لقاح ملتحمه با دوز مورد نظر از بروسلا ملیتنسیس سویه H38 مورد آزمایش قرار گرفتند.توسط این آزمایش سقط جنین قابل ملاحظه با تایید ایتولوژی برای سویه مورد نظر در گاوها بدست آمد.آزمایشها برای سویه مورد بحث روی حیوانات در بدو تولد انجام شد.آزمایش برای سویه مورد نظر در غدد لنفاوی پرسکاپولار^[۳۰] و رتروماماری^[۳۱] و انجام شد و چهار تا شش هفته پس از تولد موجب مرگ آنها شد.تست معتبر نیست مگر اینکه حداقل ۷۰ درصد حیوانات غیر واکسینه شده،علائم سقط جنین به دلیل سویه مورد نظر را نشان دهند، عفونت توسط سویه مورد نظر در موقع تولد رخ داده است، نشان دهند عفونت غدد لنفاوی پرسکاپولار و رتروماماری در هنگام مرگ وجود داشته است.واکسن با تست مطابق است اگر ، کمتر از ۳۰ درصد حیوانات واکسینه شده به خاطر سویه مورد نظر دچار سقط جنین شده باشند.سویه مورد نظر در بیش از ۵۰ درصد حیوانات واکسینه شده در هنگام تولد یافت نشود و سویه مورد نظر در بیش از ۴۰ درصد حیوانات واکسینه شده در هنگام ذبح یافت نشود.( آشفورد و همکاران،۲۰۰۴)
بروسلا ملیتنسیس موجود در واکسن توسط مورفولوژیستهای شایسته،آزمایشهای سرم شناسی و بیوشیمی و کشت در آزمایشگاه شناسایی شد.سویهRev1 با اضافه کردن ۳میکروگرم بنزیل پنیسیلین سدیم در میلی لیتربه محیط کشت ایجاد شد.سویه روی آگار شامل ۵/۲میکروگرم استرپتومیسین رشد کرد.پیشگیری از این بیماری با واکسیناسیون دامها، از بین بردن دامهای آلوده و نیز پاستوریزاسیون محصولات لبنی حاصل میشود. هر چند برای دامها واکسنهای تجاری که سویه های تخفیف حدت یافته اند ، استفاده میشود . اما استفاده از آنها موجب بروز اختلال سرولوژیک در روش های تشخیصی شده و موجب بیماری انسان نیز میشوند آشفورد و همکاران،(۲۰۰۴) . لذا نیاز است که استراتژی طراحی واکسن ها جهت بروسلوز مورد بازنگری قرار گیرد. یکی از این استراتژیها، استفاده از واکسنهای زیر واحدی است .ایمنی موثر نسبت به بروسلوز ایمنی سلولی است اسکندروس و همکاران،(۲۰۱۱).بر خلاف بروسلوز حیوانی، واکسنهای تأیید شده ای برای پیشگیری از بروسلوز انسانی هنوز در دسترس نیست. لذا چاره جویی برای یافتن راه حلهای دیگری جهت واکسیناسیون انسان و دام با بهره گرفتن از انواع آنتی ژنهای پروتئینی و غیر پروتئینی بروسلاها و یا ترکیبی از آنها لازم به نظر می رسد . به منظور ساخت این واکسنها پی بردن به خواص آنتی ژنیک و شیمیایی انواع آنتی ژنهای بیان شده در این باکتری ا لزامی است. پروتئینهای غشای خارجی بروسلا در ایجاد پاسخ ایمنی سلولی در این باکتری نقش کلیدی دارند. به همین خاطر تعدادی از این پروتئینهای غشای خارجی کلون و بیان شده اند.( اسکندروس و همکاران،۲۰۱۱)
پروتئین های بروسلا ملیتنسیس شامل kDa 20 , kDa 28 , و kDa 31 , پروتئینهای غشای خارجی بروسلاآابورتوس شامل kDa 17 , kDa 16.5 , kDa 25 , kDa 22 , kDa 36 , و پروتئین kDa 25 بروسلا اوویس(۶۲) Omp31 یک پروتئین غشای خارجی است که در سطح بروسلا ملیتنسیس صاف قرار دارد و کاندیدای واکسن زیر واحدی در برابر بروسلوز است.( ویزکاینو و همکاران،۱۹۹۶)
امروزه کنترل بیماری بروسلوز بر سه اصل کشتن دام های آلوده،پاستوریزه کردن محصولات لبنی و واکسیناسیون استوار است . واکسیناسیون دام ها برپایه تلقیح سویه های زنده ضعیف شده بروسلاآبورتوس۴۵/۲۰.S19 ) )و بروسلا ملیتنسیس (Rev1) است که استفاده از این واکسن ها در دام با محدودیت هایی همراه است (ویزکاینو و همکاران(۱۹۹۶)؛راجان(۲۰۰۲). همچنین واکسنهای بروسلوز انسانی شامل باکتری غیر فعال شده و یا سویه های زنده تخفیف حدت یافته با دومشکل اساسی مواجه اند : نخست آنکه گاهی ایجاد بیماری می نمایند و دوم آ نکه با واکنش های ازدیاد حساسیت ناخواسته همراهند . در همین راستا، در سالهای اخیر ایمنی زایی با آنتی ژن های مختلفی از گونه های بروسلا به شکل مونووالان طبیعی، کونژوگه و یا نوترکیب مورد مطالعه وبررسی قرارگرفته است (بتس،۱۹۹۳؛باتاچارجی،۲۰۰۲). از بین عوامل ویرولانس این ارگانیسم، لیپوپلی ساکارید به عنوان عامل ویرولانس اصلی (LPS) شناخته شده است و سویه های جهش یافته و فاقد این جزء از دیواره سلولی فاقد ویرولانس و توان بقای درون سلولی هستند همچنین LPSبه لحاظ ایمونولوژیک، آنتی ژن اصلی سطح سلولی بروسلا محسوب می شود بتس(۱۹۹۳)؛عباس و همکاران(۱۹۹۷) .به همین دلیل امر وزه استفاده از LPS بروسلا به دلیل داشتن خواص آنتی ژنیک و ایمونوژنیک قوی جهت طراحی و تولید یک واکسن موثر انسانی بسیار مورد ارزیابی و مطالعه قرار می گیرد (شریفات و همکاران،۲۰۰۸؛کاروف و همکاران،۱۹۸۴)
۱-۱۱- دیواره ی سلولی باکتری های گرم منفی:
۱-فضای پری پلاسمیک
۲-لیپو پروتئین ها (LP)